Amplisens hcv fl

Simptomai

Nuo šaltinių, parkų ir sodų šilumos raktus veikia. Tomas perebuvayuchi dėl gamtos, varto poturbuvatsya apie vslnu bepeke, abi.

2012-03-01

AmniSure testas

Taip pat galite nusipirkti testą, skirtą vaistažolių skysčių nutekėjimo iš nėščios Amnyshur nustatymui vaistinėse Kijeve:
1. Vaistinė "Arnica".

Birželio 8 d

FLOROCENOSIS

Visapusiškas naujos kartos testas, skirtas visoms kliniškai reikšmingoms urogenitalinio trakto infekcijoms diagnozuoti reprodukcinio amžiaus moterims..

INSTRUKCIJOS. "AmpliSense HCV-genotipas-FL" AmpliSense

loading...

Siužetas

loading...

1 priemonės naudojimo Rinkinys reagentus aptikimo ir diferenciacijos genotipo hepatito C (HCV) klinikiniuose medžiagoje, naudojant polimerazės grandinine reakcija (PGR) su hibridizacija-fluorescencijos aptikti "realaus laiko" režimu "AmpliSens HCV-genotipas-FL» AmpliSens Federacinė biudžeto instituciją Mokslinis centras "Centrinis tyrimų institutas epidemiologijos", Rusijos Federacija, Maskva, Novogireevskaya gatvė, 3a

2 TURINYS SANTRUMPOS SĄRAŠAS. 3 TIKSLAS. 3 METODO PRINCIPAS. 3 REAGENTO KOMPLEKTO FORMATAI IR FORMOS. 5 ANALIZĖS CHARAKTERISTIKOS. 5 APSAUGOS PRIEMONĖS. 6 PAPILDOMOS MEDŽIAGOS IR ĮRANGA. 7 TYRIMO MEDŽIAGOS SURINKIMAS, TRANSPORTAS IR SAUGOJIMAS. 9 FRT FORMATO SUDĖTIS, KURIUOSE VYKDAMI PGR TYRIMŲ RNO EKSTRAHAVIMAS MOKSLINIŲ MOKSLINIŲ MĖGINIŲ, KURIUOSE REKOMENDUOJAMA ANKSTESNIŲ TRANSCRIPTION REACTION A. Paruoškite vamzdelius atvirkštiniams transkripcijoms. Pagerinimo vamzdžių paruošimas naudojant PGR komplekto reagentų komplektą. FRT-G A2 variantas. Vamzdžių paruošimas amplifikavimui naudojant PCR rinkinio reagentų komplektą (FRT-G variantas) B. Padarymas amplifikacijai naudojant aptikimo sistemas realiuoju laiku. GALIOJIMO, TRANSPORTO IR SAUGOJIMO SĄLYGŲ ANALIZĖ IR INTERPRETACIJA RIBO-Sorb ". 2 PRIEDĖLIS. RNR EKSTRAHIZAVIMAS, NAUDOJAMUOSE" RIBO-PREP "REIKALAVIMŲ SUDĖTIS SIMBOLIAI, NAUDOJAMI PRINT PRODUKTUI X (RG, IQ, MX, DT, SC) / VER / 2 puslapis iš 32

3 santrumpas, šie sutrumpinimai ir simbolius, kurios naudojamos šių instrukcijų: DNR dezoksirubonukleinovaya rūgšties kDNR papildomą DNR RNR ribonukleininės rūgštį iš atvirkštinės transkripcijos EKO vidaus kontrolės mėginio OKO Neigiama kontrolė PKO teigiama kontrolė K + - teigiama kontrolė PGR K - neigiamas kontrolės PGR Gerai - neigiamas ekstrakcijos kontrolė PCR polimerazės grandininė reakcija FBUN Centrinis tyrimų institutas epidemiologijos Rospotrebnadzor HCV FRT PASKYRIMAS Federalinės biudžeto įstaiga "Federalinės vartotojų teisių apsaugos ir žmonių gerovės priežiūros tarnybos centrinės tyrimų institutas". "Hepatito C" viruso fluorescencinis aptikimas "realiuoju laiku". "AmpliSense" HCV genotipo-FL reagento rinkinys skirtas identifikuoti ir diferencijuoti viruso genotipus Klinikinėje medžiagoje esantis hepatitas C (HCV) polimerazės grandinės reakcijos (PCR) metodu, naudojant hibridizacijos-fluorescencijos aptikimą "realaus laiko" režimu. HCV genotipų 1a, 1b, 2a, 3a, 4 nustatymas atliekamas naudojant "PCR rinkinio" variantą FRT-g1-4; HCVa 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 genotipai nustatomi naudojant "PCR rinkinio" variantą FRT-g1-6. Reagentų rinkinį rekomenduojama naudoti nustatant HCV RNR tyrinėjamuose mėginiuose, naudojant reagentų rinkinius, skirtus kokybiškai ir kiekybiškai nustatyti hepatito C viruso RNR (pvz., AmpliSense HCV-FL, naudojant hibridizacijos fluorescencijos aptikimą arba AmpliSense HCV- EPh ", naudojant elektroforezinį amplifikacijos produktų aptikimą (pagamintas FBUN TsNII Epidemiology Rospotrebnadzor)). DĖMESIO! Atliekant išsamią ligos diagnozę atsižvelgiama į PGR tyrimų rezultatus. METODO PRINCIPAS 1 Pagal Europos Sąjungos direktyvą 98/79 / EB. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 3 iš 32

4 Tyrimo principas grindžiamas RNR ekstrakcija iš kraujo plazmos kartu su rekombinantiniu vidiniu kontroliniu mėginiu (ASD), atliekant RNR atvirkštinę transkripcijos reakciją ir cdna amplifikavimą PCR su hibridizacijos-fluorescencijos nustatymu "realiu laiku". Siekiant pašalinti klaidingai neigiamus rezultatus, VKO buvo įtrauktas į tyrimą, kuris leidžia kontroliuoti visus analizės etapus ir įvertinti PGR inhibitorių poveikį tyrimų rezultatams. Vieno mėginio HCV genotipo nustatymas atliekamas keliuose mėgintuvėliuose, kiekviename mėgintuvėlyje diferencijuojami du HCV genotipai arba vienas HCV ir VKO genotipas. Komplektas skirtas prietaisams su dviem ar daugiau fluorescencinių aptikimo kanalų. Lentelėje rodomi kanalai, pagal kuriuos HCV genotipai nustatomi kiekvienam reakcijos mišiniui. Reakcijos mišinys 1b / 3a 1a / 2 BKO / 4 5a / 6 2 Kanalo aptikimo HCV genotipai FAM / Žalioji 1b 1a CTP 5a JOE / HEX / Geltona / Cy3a 3 FRT-g1-6 versija įtraukta į PCR rinkinį. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 4 iš 32

5 REAGENTŲ KOMPLEKTŲ FORMATAI IR FORMOS Reagentų rinkinys pateikiamas 1 formatu: FRT formatas Reagentų komplektas yra 7 konfigūracijos rinkinių: 1 forma apima RIBO-sorbinių reagentų rinkinių variantą 50, REVERTA-L variantą 50, PCR rinkinį FRT-g1-4 variantas. 2 forma apima 50 variantą "RIBO-prep" reagentų komplektai, 50 variantą "REVERT-L", parinktį "PCR kit" FRT-g1-4. 3 forma apima "PGR rinkinio" reagento komplekto variantą FRT-g1-4. 4 forma apima "RIBO-sorbų" reagentų rinkinius, 50 parinktį, "REVERT-L" 50 parinktį, "PCR rinkinio" parinktį FRT-g1-6. 5 forma apima 50 variantą "RIBO prep" reagentų komplektai, 50 variantą "REVERT-L", parinktį "PCR rinkinys" FRT-g1-6. 6 forma apima "PCR rinkinio" reagento komplekto variantą FRT-g1-6. 7 forma apima birių reagentų rinkinius, supakuotus į atskirus reagentus, reagentų ženklinimą ant jų pakuotės. Formos konfigūracija 1, 2, 3 yra skirta nustatyti, su genotipas 1a, 1b, 2, 3a, 4 C. formų HBV surinkimo 4, 5, 6 yra skirta nustatyti, su genotipas 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 HCV C. Užpildymo formos 1, 2, 4, 5 yra skirtos išsamiems PGR tyrimams, įskaitant RNR ekstrakciją iš klinikinės medžiagos, RNR atvirkštinę transkripciją ir PCR amplifikaciją cdna su hibridizacijos-fluorescencijos aptikimu "realiuoju laiku". Kombaino 3 ir 6 formos yra skirtos PCR amplifikacijai cdna su hibridizacijos-fluorescencijos aptikimo "realiuoju laiku" režimu. Atlikti pilną analizę būtina naudoti reagentų rinkinius FBUN Gamybos tyrimų institutas epidemiologijos RNR ekstrakcijos (reagentų rinkiniai "ribo-Sorb" arba "ribo-Prep") ir atvirkštinės transkripcijos reakcija (komplektas reagentas "Reverte-L"). Komplektacijos 7 forma skirta gamybos tikslais, kad vėlesni ženklai būtų pažymėti kliento kalba ir būtų komplektuojami visi rinkiniai. DĖMESIO! Formos 7 rinkinys naudojamas tik pagal taisykles, patvirtintas FSC Centrinio tyrimų instituto epidemiologijos Rospotrebnadzor. ANALIZĖS CHARAKTERISTIKOS 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 5 puslapis iš 32

6 Analitinis jautrumas Ekstrakcijos tūris, μl RNR / DNR ekstrakcijos rinkinys 100 "RIBO-sorb" 100 "RIBO-prep" Amplifikacijos ir aptikimo komplektas "PCR rinkinys" versija FRT-g1-4, galimybė "PCR rinkinys" FRT- g1-6 "PCR rinkinys" versija FRT-g1-4, "PCR rinkinio" versija FRT-g1-6 Analitinis jautrumas, TV / ml 2,5x10 3 5x10 3 Analitinė specifiškumas Reagentų rinkinio analizės specifiškumo įvertinimas nenustatė kryžminių reakcijų tarp hepatito C viruso 1a, 1b, 2a, 3a, 4, 5a ir 6 genotipai, naudojant labai koncentruotus rekombinantus kad kovariantinė teigiami kontroliniai mėginiai ir kraujo plazmos mėginiai, atitinkantis HCV genotipo. ATSARGUMO PRIEMONĖS darbas turi būti atliekamas laboratorijoje atlikti molekulyarnobiologicheskie (PGR) studijuoja klinikinius mėginius infekcijos sukėlėjų buvimą, laikantis sanitarinių-epidemiologinių taisyklės SP "Saugumo darbui su III IV mikroorganizmų patogeniškumo grupių (pavojaus) ir aktyvatorių parazitinių ligų", SanPin "Sanitarijos "Epidemiologiniai medicininių atliekų apdorojimo reikalavimai" ir gairės MU "Laboratorijų, naudojančių amplifikavimo metodus, organizavimas n kleinovyh rūgštys, kai darbo su medžiagų, kuriose yra mikroorganizmai patogeniškumo grupių I IV ". Darbo metu visada laikykitės šių reikalavimų: - Tiriami mėginiai turi būti laikomi užkrečiamais, organizuoti darbą ir saugoti pagal bendrąją įmonę "Darbas su III IV patogeniškumo (pavojingumo) grupių patogeniškumo (pavojingumo) grupėmis ir parazitinių ligų sukėlėjų mikroorganizmais". - Išvalyti ir dezinfekuoti išsiliejusius mėginius arba reagentus naudojant dezinfekavimo priemones pagal bendrąją įmonę "Darbas su III IV tipo patogeniškumo (pavojingumo) grupių patogeniškumo (parazitinių ligų) ir patogenų mikroorganizmų saugumu". - Laboratorinis procesas turi būti vienareikšmis. Analizė atliekama 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 6 iš 32

7 atskiri kambariai (zonos). Darbas turėtų prasidėti pasirinkimo zonoje, tęsti zonoje stiprinimo ir aptikimo. Nenaudokite pavyzdžių, įrangos ir reagentų į vietą, kurioje buvo atliktas ankstesnis proceso etapas. - Pašalinkite nepanaudotus reagentus pagal SanPiN "Sanitarinių ir epidemiologinių reikalavimų medicinos atliekų tvarkymui". DĖMESIO! Pašalinus atliekas po amplifikacijos (mėgintuvėliai, kurių sudėtyje yra PCR produktų), nepriimtina atidaryti vamzdelius ir pabarstyti turinį, nes tai gali sukelti laboratorinės zonos, įrangos ir reagentų užteršimą PCR produktais. Pagal šį vadovą naudokite rinkinį griežtai pagal numatytą paskirtį. Leiskite dirbti su komplektu tik specialiai apmokytu personalu. Nenaudokite rinkinio pasibaigus galiojimo laikui. Naudodamiesi vienkartinėmis pirštinėmis, laboratorinėmis apvalkalu, dirbdami su mėginiais ir reagentais apsaugokite akis. Kruopščiai praplaukite po darbo. Venkite kontakto su oda, akimis ir gleivine. Susilietimas su akimis nedelsiant nuplauti paveiktą vietą vandeniu ir kreiptis į gydytoją. Pagal saugos duomenų lapą (MSDS saugos duomenų lapą) galima gauti paprašius. PAPILDOMI MEDŽIAGOS IR įrangos srityje 1. ekstrahavimas RNR iš klinikinės medžiagos 1. reagentų RNR / DNR "ribo-Sorb" (N) "ribo paruošimo" (tu) arba kita rekomenduojama FBUN CRI epidemiologijos rinkiniai dirbant su pilna formų 3, laminar box. 3. Sūkurys. 4. Mikrocentrifuga Eppendorf tipo mėgintuvėlėms iki 12 tūkst. G. 5. Termostatas Eppendorf tipo mėgintuvėliams nuo 25 iki 100 C. 6. Automatiniai kintamo tūrio indai (nuo 5 iki 50 μl, nuo 20 iki 200 μl ir nuo 100 iki 1000 μl). 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 7 iš 32

8 7. Vienkartinis polipropileninis prispaudžiamasis ar tvirtai uždaromas 1,5 ml vamzdelis. 8. Vienkartiniai patarimai su filtru iki 100 μl, iki 200 μl ir iki 1000 μl trikojiuose. 9. Vakuuminis medicininis aspiratorius su kolbos gaudyklėmis, kad pašalintų viršutinę skylę. 10. Vienkartiniai patarimai iki 200 μl viename trikojime. 11. Trikojis 1,5 ml vamzdeliams. 12. Šaldytuvas nuo 2 iki 8 ° C. 13. Atskirai apsirengęs chalatas, skrybėlės, batai ir vienkartinės pirštinės pagal MU talpos su dezinfekavimo tirpalu. SRITIS 2. Atlikti atvirkštinės transkripcijos reakcija, ir į "realiu laiku" amplifikacija 1 rinkinys reagentų atlikti atvirkštinės transkripcijos reakcija "Reverte-L» (W) veikimo metu suformuoja užbaigtą 3, Boksas abacterial oro aplinka (PCR-langelį). 3. Centrifuga / Sūkurys. 4. Kintamo tūrio automatiniai balionėliai (nuo 5 iki 50 μl ir nuo 20 iki 200 μl). 5. Vienkartiniai patarimai su filtru iki 100 μl ir iki 200 μl trikojiuose. 6. Trikojis 0,5 ml tūbelėms arba 0,2 ml ar 0,1 ml (pagal naudojamų vamzdelių tipą). 7. Šaldytuvas nuo 2 iki 8 ° C su šaldikliu ne didesnis kaip minus 16 ° C. 8. Atskiros apsirengimo chalatas, skrybėlės, batai ir vienkartinės pirštinės pagal MU talpos galus. Vykdant atvirkštinės transkripcijos reakciją, naudojant "REVERET-L": 10. Vienkartiniai polipropileniniai vamzdeliai, kurių tūris yra 0,2 ml arba 0,5 ml (priklausomai nuo naudojamo termostato arba stiprintuvo modelio, kuriame atliekama atvirkštinės transkripcijos reakcija). 11. Termostatas Eppendorfo tipo vamzdžiams nuo 25 iki 100 ° C arba programuojamasis stiprintuvas (pvz., Terzik (DNR technologija, Rusija), Gradient Palm Cycler (Corbett Research, Australija), GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems JAV)). 12. Sukuriant atvirkštinę transkripcijos reakciją mažiau nei 10 tirtų 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 8 iš 32

9 mėginių kintamo tūrio automatinis dozatorius (nuo 0,5 iki 10 μl). 13. Sukūrę atvirkštinės transkripcijos reakciją mažiau nei 10 tirtų mėginių, vienkartiniai patarimai su filtru iki 10 μl viename trikojime. Dirbant su "PCR rinkinys": 14. programuojamas temperatūros pasikeitimo prietaisą rotacinis tipo (pvz, Rotorius Genų 3000 arba 6000 (Corbett tyrimų, Australija), Rotorius Genų Q (Qiagen, Vokietija)), arba tabletė tipo termociklerį (pvz, icycler iq5 (Bio-Rad, JAV)), arba sustiprinamas SmartCycler II (CEPHEID, JAV), arba Mx3000P, Mx3005P (Sratagene, JAV) ir rekomenduojamas FBUN tyrimų institutas epidemiologijos gairėse dėl šio reagento komplektas naudojimui). 15. Vienkartiniai polipropileniniai vamzdeliai, skirti PCR: a) plonasieniai vamzdeliai PGR, kurių tūris yra 0,2 ml, su išgaubtu dangteliu (neišplėstos arba išimtos), naudojant tabletės tipo prietaisą; b) plonasienių 0,2 ml PCR mėgintuvėlių su plokščiu dangteliu (be streso) arba juostelių, kurių tūris yra 0,1 ml, naudojant rotacinį įrenginį. c) 0,025 ml PCR mėgintuvėlius (Cepheid, JAV), naudojant "SmartCycler II" instrumentą (Cepheid, JAV). 16. Pažymėtas trikojis (naudojant planšetinio tipo įrenginius). 17. Vienkartiniai polipropileniniai vamzdeliai, skirti PGR (plokščia dangteliu, nestandartiniai), skirti 0,5 ml. 18. Centrifuga ir mėgintuvėlis (Cepheid, JAV), naudojant "SmartCycler II" (Cepheid, JAV). Mėginių rinkimo, transportavimo ir saugojimo bandomosios medžiagos iki darbų pradžios turi būti susipažinę su gairėmis "imtis, Transportavimas, sandėliavimas klinikinės medžiagos PTsRdiagnostiki" sukūrė FSIS CRIE Rospotrebnadzor, Maskvoje, 2008 metais PGR tyrimai, naudojant periferinio kraujo plazmą. Norint gauti plazmą, kraujas paimamas į mėgintuvėlį su 3% EDTA tirpalu, kurio greitis yra 20: 1 (20 dalių kraujo vienoje EDTA dalyje). Kelis kartus keiskite uždarą bandinį su krauju. Per 6 valandas nuo kraujo surinkimo momento plazma turi būti surenkama ir perkelta į naują vamzdelį. Tuo būdu mėgintuvėlis su krauju centrifuguojamas 20 min. G, po kurio plazma paimama ir perkelta į atskirą vienkartinį 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 9 iš 32

10 mėgintuvėlių. Plazmą galima laikyti ne ilgiau kaip 3 dienas 2-8 ° C temperatūroje ir ilgą laiką ne aukštesnėje kaip -68 ° C temperatūroje. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 10 iš 32

11 FORMATAS FRT FORMATAS FRT SUDĖTIS reagentų rinkinio "ribo-Pīlādzis" variantas 50 reagentas komplektas RNR / DNR išskyrimo iš klinikinės medžiagos apima: Reagentas Aprašymas tomas, ml maks lizavimo tirpalo A sprendimą skalbimo vieną tirpalo kiekį, reikalingą plovimo 3 tirpalas plovimo 5 1 buteliuko buteliukas 50 1 buteliukas 20 1 buteliukas Sorbentas Balta suspensija 1,25 1 vamzdis RNR buferis 0,5 5 vamzdeliai Reagento rinkinys skirtas izoliuoti RNR / DNR iš 50 mėginių, įskaitant kontrolinius. Įtraukti į surenkama liejimo forma 1 ir 4. reagentų rinkinio "ribo-prep" variantas 50 reagentas komplektas RNR / DNR išskyrimo iš klinikinės medžiagos apima: reagentų aprašymas apimties, ml maksimalų lizės tirpalas, kad nusodintų tirpalą plauti tirpalą 3 skalbimas 4 RNR buferis Skaidrus mėlynas spalvos buteliukas 20 1 buteliukas 25 1 buteliukas 10 1 buteliukas 1.2 4 vamzdeliai Reagento rinkinys skirtas 50 RNR / DNR izoliavimui, įskaitant kontrolę. Įtraukta į 2 ir 5 skirstymo formą. Reagento komplekto "Reverse-L" reagentų komplekto variantas 50 Reagento rinkinys 3. Laikant lizuojantį tirpalą, lizės tirpalą ir plovimo tirpalą 1 2 - 8 C temperatūroje, nuosėdos gali formuotis kristalais. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 11 iš 32

12 FRT FORMATAS cdna gamybai RNR šablone yra: RT-G-mix-1 RT-mix Revertase (MMlv) DNR buferis Reagentas Apibūdinimas Tūris, ml 0,015 vamzdelių 0,125 5 vamzdeliai 0,03 1 vamzdelis 1, 2 1 vamzdelis Reagento komplekto versija 50 skirta atlikti 60 atvirkštinės transkripcijos reakcijų, įskaitant kontrolę. "PCR rinkinio" reagento komplektas. HCT cdna genotipų (1a, 1b, 2, 3a, 4) PCR amplifikacijos komplekto FRT-g1-4 versija su realaus laiko hibridizacijos aptikimu apima: PCR mišinį-1- Frt HCV genotipas 1b / 3a PGR mišinys-1-Frt HCV genotipas 1a / 2 PGR sumaišoma-1-FRT HCV EKR / 4 genotipu reagento aprašymas tūris, ml skaičius RT-PCR-mišinio-2-FEP / FRT polimerazės (TaqF) HCV cdna PKO genotipai 1b / 3a HCV cdna PKO genotipai 1a / 2 PKO cdna HCV CTP / genotipas 4 TE buferis 0.6 1 mėgintuvėlis 0.6 1 vamzdis 0.6 1 vamzdelis 0.3 3 vamzdelis 0,03 3 mėgintukai 0,2 1 mėgintuvėlis 0,2 mėgintuvėlis 0,2 1 mėgintuvėlis 0,5 1 mėgintuvėlis K Reagento rinkinys suprojektuotas 55 tyrimams (165 amplifikacijos reakcijos), įskaitant kontrolę. Įtraukti į 1, 2 ir 3 konfigūracijų rinkinius. Atrankos pavyzdžiai pridedami prie reagento rinkinio: 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 12 psl. Iš 32

13 FRT FORMATAS Reagentas Apibūdinimas Tūris, ml OKO VKO STI-248-rec 0.5 1 vamzdis 0,5 1 vamzdelis Bandymo komplektas "PCR rinkinys" versija FRT-g1-6 komplektas PCR amplifikacijai cdna genotipams ( 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6) HCV su gibridizatsionnofluorestsentnoy aptikti "realiu laiku" apima: reagentas Aprašymas tūris, ml maks PGR sumaišoma-1-Frt HCV genotipas 1b / 3a PGR smes- 1-Frt HCV genotipams 1a / 2 PGR mišinys-1-FRT HCV EKR / genotipas 4 PGR sumaišoma-1-Frt HCV genotipas 5a / 6 AT-PGR-mišinys-2-FEP / FRT polimerazės (TaqF) FFP kDNR HCV genotipai 1b / 3a PKO cdna HCV genotipai 1a / 2 PKO cdna HCV EKO / genotipas 4 PKO cdn HCV genotipai 5a / 6 TE-buferis 0.6 1 bandomasis vamzdelis 0.6 1 bandomasis vamzdelis 0.6 1 bandomasis vamzdelis 0.6 1 bandomasis vamzdelis 0.3 4 mėgintuvėlis 0,03 4 mėgintuvėliai 0,2 1 mėgintuvėlis 0,2 mėgintuvėlis 0, 2 1 vamzdis 0.2 1 vamzdis 0.5 1 vamzdelis Reagento rinkinys yra skirtas 55 tyrimams (220 amplifikacijos reakcijų), įskaitant kontrolę. Įtrauktas į 4, 5 ir 6 konfigūracijos rinkinį. Reagentų rinkinio pridedami atrankos etapo kontroliniai mėginiai: 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 13 psl. Iš 32

14 FORMATAS FRT Aprašymas reagento tūris, ml maks OKO EKR STI-248-REC 0,5 0,5 1 tūbelė 1 tūbelė PGR TYRIMAI IŠDĖSTYMAS PGR tyrimas susideda iš šių žingsnių: ekstrakcija RNR nuo klinikinius mėginius. Atvirkštinės transkripcijos reakcijos atlikimas. Amplifikacija naudojant hibridizacijos-fluorescencijos aptikimą "realaus laiko" režimu. Rezultatų analizė ir aiškinimas. Informacija apie analizės procedūros remiasi naudojamos įrangos yra pateikta "gairių reagento rinkinio naudojimo nustatymo ir diferenciacijos virusinių genotipo hepatito C (HCV) klinikiniuose medžiagoje, naudojant polimerazės grandinine reakcija (PGR) su hibridizacija-fluorescencinį aptikimą" tipo AmpliSense HCV-genotipas-FL ", sukurtas" FSC "Centrinio mokslinių tyrimų instituto epidemiologijos" Rospotrebnadzor ". RNO EKSTRAHAVIMAS IŠ TYRANČIŲ MĖGINIŲ DĖMESIO! Kai dirbate su RNR, būtina naudoti tik vienkartines plastikines reikmenis su specialiais žymenimis "RNasefree", "be DNase". RNR gavybos reagentų rinkiniai naudojo rekomenduojamas FBUN CRI Epidemiologija: naudojant komplektas "ribo-Sorb" reagentai operacinę procedūrą, matyti 1 priedą "perkėlimas RNR naudojant reagentą komplektas" ribo-Sorb ".. naudojant RIBO prep reagento rinkinį žr. 2 priedėlio "RNR ekstrahavimas naudojant RIBO prep reagento rinkinį" metodiką. DĖMESIO! Gautas RNR preparatas nėra saugomas, reakcija yra atvirkštinė 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 14 iš 32

15 FORT FRT transkripcija turėtų būti atliekama iškart po RNR zondo gavimo. REVERSINIO TRANSCRIPTION REAKTUVŲ VARTOJIMAS Bendras reakcijos mišinio tūris yra 20 μl, įskaitant 10 μl RNM mėginio tūrį. DĖMESIO! Kai dirbate su RNR, būtina naudoti tik vienkartines plastikines reikmenis su specialiais žymenimis "RNasefree", "be DNase". A. Reversinės transkripcijos vamzdžių paruošimas Reagentams ir RNR mėginiams įterpti į vamzdelius naudojami vienkartiniai patarimai su filtrais. DĖMESIO! Reakcijos mišinio komponentai turi būti maišomi prieš reverso transkripcijos reakciją. 1. Prieš pradėdami darbą atšildykite, kruopščiai sumaišykite su sūkuriu RT-mišiniu ir RT-G-mix-1. Išleidimo lašeliai iš mėgintuvėlių dangtelių. 2. Pasirinkite reikiamą skaičių vamzdelių, kurių tūris yra 0,2 arba 0,5 ml (priklausomai nuo naudojamo termostato arba stiprintuvo modelio) atvirkštinės transkripcijos reakcijai, atsižvelgiant į bandymų ir kontrolinių mėginių skaičių (viena ekstrakcijos kontrolės priemonė (OK)). Ženklinkite vamzdelius. 3. Atliekant mėginių atvirkštinę transkripciją: a) paruoškite reakcijos mišinį 12 reakcijų. Norėdami tai padaryti, į mėgintuvėlį su RT mišiniu įpilkite 5 μl RT-G-mix-1, gerai sumaišykite su sūkuriu ir nusodinkite iš mėgintuvėlio dangtelio. b) Į gautą tirpalą įpilama 6 μl revertazės (MMlv), pipete 5 kartus, sumaišoma su sūkuriu. Ištraukite lašelius iš vamzdžio dangčio, trumpai centrifuguojant. 4. Atliekant atvirkštinę transkripciją, kurioje yra mažiau kaip 10 mėginių: Reakcijos mišinį paruošti reikia reagentų 1 reakcijai sumaišyti tokia tvarka: 10 μl RT mišinys, 0,4 μl RT-G-mišinys-1 ir 0, 5 μl revertazės (MMlv) (taip pat žr. 1 lentelę). Įmaišius RT-G-mix-1 ir revertoso (MMlv) mišinį, kiekvieną reagentą pipete pipete mažiausiai 5 kartus. Kruopščiai sumaišykite mišinį su sūkuriu ir nusodinkite lašelius iš vamzdelio dangtelio. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 15 iš 32

16 FRT FORMAT DĖMESIO! Revertase (MMlv) yra jautri šilumai! Nepalikite to kambario temperatūroje ilgą laiką! Iš karto po naudojimo įdėkite šaldytuvą į šaldiklį! Reagento kiekis pagal reakciją (μl). Klinikinių mėginių skaičius. Reakcijos mišinio paruošimo schema 10,00 0,4 0,5 RT-mix RT-G-mix-1 Revertase (MMlv), 4 3,, 8 3,, 2 4,, 6 4,, 0 5.0 5. Į paruoštus mėgintuvėlius įpilama 10 μl paruošto reakcijos mišinio. 1 lentelė. 6. Pridėkite 10 μl RNR mėginių, atskirtų nuo klinikinių ir kontrolinių mėginių, į gatavus vamzdžius pagal ženklinimą. Iš buteliuko dangtelio atsargiai išpūsta ir nuosėdos. DĖMESIO! Pridedant RNR mėginius, izoliuotus naudojant RIBO sorbų reagentų rinkinį, būtina išvengti sorbento įsiskverbimo į reakcijos mišinį. B. Atvirkštinės transkripcijos reakcijos atlikimas 1. 30 minučių padėkite vamzdelius į stiprintuvą (termostatą) 37 ° C temperatūroje. DĖMESIO! Jei naudojate stiprintuvus su "realaus laiko" aptikimo sistema atvirkštinės transkripcijos atveju, reikia programuoti prietaisą atitinkamai programai atlikti (žr. 2 lentelę ir "Reagentų rinkinio naudojimo gaires, skirtas nustatyti ir diferencijuoti hepatito C viruso (HCV) genotipus"). klinikinėje medžiagoje polimerazės grandininės reakcijos (PCR) metodu su hibridizacijos-fluorescencijos nustatymu "AmpliSense HCV-genotipas-FL", parengtas FBUN Centrinio tyrimų instituto epidemiologijos Rospotrebnadzor). 2 lentelė. Įvestų reagentų kiekiai pateikiami atsižvelgiant į tirtų mėginių skaičių (klinikiniai mėginiai ir 1 RNR ekstrahavimo stadijos kontrolė) ir rezervą 1 mėginio. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 16 psl. Iš 32

17 FRT FORMAT programa stiprintuvų atvirkštinės transkripcijos reakcijos vykdymo su realaus laiko nustatymo sistema 5 etapo temperatūra, C žingsnio trukmė fluorescencijos matavimas ciklų skaičius min 1 2. Po reakcijos pabaigos į vamzdelius įpilama 20 μl DNR buferio naudojant naują filtro antgalis kiekvienam pavyzdžiui. Švelniai sumaišykite sūkuryje ir nuosėdos iš buteliuko dangtelio. Cdna, gaunama atvirkštinės transkripcijos reakcijoje, naudojama PCR amplifikavimui. Gatavą cdna preparatą galima laikyti ne aukštesnėje kaip -16 ° C temperatūroje 1 savaitę arba ne aukštesnėje kaip -68 ° C temperatūroje per metus. PATIKRINTI PAGAMBAI, NUSTATANT REALIZAVIMO REŽIMĄ A. Amplifikacinių vamzdžių paruošimas Amplifikacijos vamzdžių pasirinkimas priklauso nuo naudojamo stiprintuvo. Reagentams, cdna mėginiams ir kontroliniams bandiniams įterpti į mėgintuvėlius, naudojami vienkartiniai patarimai su filtrais. Bendras reakcijos mišinio tūris yra 25 μl, įskaitant cdna mėginio tūrią 10 μl. DĖMESIO! Prieš atlikdami PGR tyrimus, reakcijos mišinio komponentai turi būti maišomi. Pagal skaičiavimo lentelę būtina sumaišyti reagentus, pagrįstus reikiamu reakcijų skaičiumi, įskaitant bandymo ir kontrolinių bandinių bandymą (žr. 3 ir 4 lenteles). A1. Pagerinimo vamzdžių paruošimas naudojant PCR rinkinį; versija FRT-g1-4 5 Pavyzdžiui, Rotor-Gene 3000 arba 6000 ("Corbett Research", Australija); Rotor-Gene Q (Qiagen, Vokietija); iq5 ("Bio-Rad", JAV); Mx3000P (Stratagenas, JAV); "DT-96" ("DNR-technologija", Rusija) ir rekomendavo šio vaistinio preparato rinkinio naudojimo rekomendacijose "Rospotrebnadzor" Centrinės mokslinių tyrimų instituto Epidemiologijos FBUN. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 17 iš 32

18 FRT FORMATAS 1. Prieš pradėdami darbą, atšildykite, kruopščiai sukraukite visus komplektų reagentus ir nusodinkite lašus iš bandinių dangtelių. 2. Pasirinkite reikiamą amplifikacinių vamzdžių skaičių, atsižvelgiant į bandymų ir kontrolinių mėginių skaičių (vieną RNR ekstrakto kontrolę, du amplifikacijos valdiklius). Vamzdžių tipas, kurį pasirinkti, priklausomai nuo naudojamo prietaiso. DĖMESIO! Kiekvienas mėginys yra analizuojamas naudojant tris reakcijos mišinius, todėl kiekvienam bandiniui reikia paruošti 3 vamzdžius. Naudodami rotacinio tipo prietaisus pažymėkite atitinkamai vamzdelius "sample_1b / 3a", "sample_1a / 2" ir "sample_vko / 4". Naudodami planšetinio tipo įrenginius naudokite pažymėtą trikojį šiuo tikslu. 3. Parinkite tris 0,5 ml tūbelius reakcijų mišinių paruošimui. Ženklinkite vamzdelius "1b / 3a", "1a / 2" ir "VKO / 4". 4. Į kiekvieną iš trijų reakcijų mišinių paruošimui skirtų vamzdelių pridedama iki 1 reakcijos: 5 μl RT-PCR mišinio-2-FEP / FRT, 0,5 μl polimerazės (TaqF) ir 10 μl atitinkamo PCR mišinio HCV-1-FRT genotipas (taip pat žr. 3 lentelę), 1b / 3a HCV genotipo PCR mišinys-1-FRT įvedamas į "1b / 3a" vamzdelį ir tt Sumaišykite gaunamus reakcijos mišinius su sūkuriu ir iš buteliuko dangtelio nusipirkite nuosėdų. DĖMESIO! Reakcijos mišiniai turi būti paruošiami 1 mėginio dalimi (žr. 3 lentelę). 5. Į stiprinimui skirtus vamzdžius įpilkite 15 μl gatavo reakcijos mišinio pagal etiketę, t. Y. reakcijos mišinys "1b / 3a" įvedamas į mėgintuvėlius, pažymėtus "mėginys_1b / 3a" ir kt. 6. Pridedamuose bandymo mėgintuvėliuose su dispersiniais reakcijų mišiniais įpilama 10 μl cdna mėginių, gautų atvirkštinės transkripcijos reakcijos metu, pagal ženklinimą, o kiekvienas mėginys, įskaitant neigiamą ekstrahavimo kontrolę (OK), turi būti pridedamas prie 3 vamzdelių, kuriuose yra išsisklaidę reakcijos mėgintuvėlys. "1b / 3a", "1a / 2" ir "VKO / 4" mišinys. 7. Įterpkite kontrolines reakcijas: a) Į laboratorinius mėgintuvėlius įpilkite neigiamą PGR (K) kontrolę, naudodami 10 μl TE buferinio tirpalo 1b / 3a, 1a / 2 ir BKO / 4 surištų reakcijų mišinių. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 18 iš 32

19 FRT FORMATAS b) teigiamą PGR (K + 1b / 3a) kontrolę mėgintuvėlyje su "1b / 3a" reakcijos mišiniu, įpilama 10 μl OTP cdna HCV genotipo 1b / 3a; c) teigiama PGR (K + 1a / 2) kontrolė mėgintuvėlyje su reakcijos mišiniu "1a / 2" įpilama 10 μl OTP cdna HCV genotipų 1a / 2; d) teigiama PGR reakcija (K + VKO / 4) bandymo mėgintuvėlyje su VKO / 4 reakcijos mišiniu pridėta 10 μl PKO cdna HCV EKO / 4 genotipo. FRT varianto reakcijos mišinių paruošimo schema Reagento tūris pagal reakciją (μl) Skaičių skaičius Klinikinių tyrimų pavyzdžiai 6 10,00 5,00 0,50 6 Klinikinių mėginių skaičius + 1 RNR + 2 kontrolinės PCR ekstrakcijos fazės kontrolė (N + 3, N klinikinių mėginių skaičius). PCR mišinys-1-FRT HCV genotipas * RT-PCR mišinys-2-FEP / FRT * 3 lentelė Polimerazė (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * Panaudotų reagentų apimtys pateikiamos su 1 mėginio dalimi. A2. Pagalbinių vamzdžių paruošimas naudojant "PCR rinkinio" reagento komplekto versiją FRT-g Prieš pradedant darbą, atšildyti, kruopščiai sumaišyti visus komplekto reagentus su sūkuriu ir išpurškti lašelius iš vamzdelių gaubtelių. 2. Pasirinkite reikiamą amplifikacinių vamzdžių skaičių, atsižvelgiant į bandymų ir kontrolinių mėginių skaičių (vieną RNR ekstrakto kontrolę, du amplifikacijos valdiklius). Vamzdžių tipas, kurį pasirinkti, priklausomai nuo naudojamo prietaiso. DĖMESIO! Kiekvienas mėginys analizuojamas naudojant keturis reakcijos mišinius, todėl kiekvienam bandiniui reikia paruošti 4 vamzdžius. Naudodami vamzdžius, kurių tūris yra 0,2 ml rotoriaus instrumentams, pažymėkite atitinkamai "specimen_1b / 3a", "specimen_1a / 2", "specimen_vko / 4" ir "specimen_5a / 6" vamzdelius. Naudodami tabletės tipo įrenginius arba naudodami dryžuotas 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 19 puslapis iš 32

20 FRT FORMAT vamzdeliai rotaciniams instrumentams naudoja pažymėtą trikojį šiuo tikslu. 3. Parinkite keturis 0,5 ml tūbelius reakcijų mišinių paruošimui. Ženklinkite vamzdelius "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" ir "5a / 6". 4. Į kiekvieną iš keturių reakcijų mišinių paruošimui skirtų vamzdelių pridedama iki 1 reakcijos: 5 μl RT-PCR mišinio-2- FRT HCV genotipo (taip pat žr. 4 lentelę), naudojant PCR mišinį-1- HCT FRT genotipai 1b / 3a įvedami į "1b / 3a" vamzdelį ir tt Sumaišykite gaunamus reakcijos mišinius su sūkuriu ir iš buteliuko dangtelio nusipirkite nuosėdų. Reakcijos mišinių paruošimo FRT variantui schema Reagento tūris pagal reakciją (μL) skaičius Klinikinių bandinių skaičius 7 10,00 5,00 0,50 FEP / FRT, 0,5 μl polimerazės (TaqF) ir 10 μl atitinkamo PCR mišinio -1-PCR mišinys-1-FRT HCV genotipas * RT-PCR mišinys-2- FEP / FRT * 4 lentelė Polimerazė (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * papildomų reagentų kiekis pateikiamas su 1 pavyzdys. 5. Į stiprinimui skirtus vamzdžius įpilkite 15 μl gatavo reakcijos mišinio pagal etiketę, t. Y. reakcijos mišinys "1b / 3a" įvedamas į mėgintuvėlius, pažymėtus "mėginys_1b / 3a" ir kt. Jei naudojama reakcijai - dryžuotų vamzdžių amplifikacija, reakcijos mišiniai turėtų būti įvedami pagal 1 pav. Pateiktą schemą. 7 klinikinių mėginių skaičius + 1 RNR + 2 kontrolinės PCR ekstrakcijos stadijos kontrolė (N + 3, N klinikinių mėginių skaičius). 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 20 psl. Iš 32

21 FRT FORMAT 4 mėgintuvėliai, naudojami vienam klinikiniam bandiniui gaminti Mišinys "1b / 3a" Mišinys "1a / 2" Mišinys "VKO / 4" Mišinys "5a / 6" Mišinys "1b / 3a" Mišinys "1a / 2" Mišinys BKO / 4 "mišinys" 5а / 6 ". 1 schema. Reakcijos mišinių ir mėginių įvedimo schema, kai naudojama polimerazės plėvelė. 6. Pridedamame bandinių mėgintuvėlyje su dispersiniais reakcijų mišiniais įpilama 10 μl cdna mėginių, gautų atvirkštinės transkripcijos reakcijos metu, pagal ženklinimą ir kiekvienas mėginys, įskaitant neigiamą ekstrahavimo kontrolę (OK), turi būti pridedamas prie 4 vamzdelių, kuriuose yra išsisklaidę reakcijos "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" ir "5a / 6" mišinys. 7. Įterpkite kontrolines reakcijas: a) pridėkite neigiamą PGR (K) kontrolę į mėgintuvėlius su 1b / 3a, 1a / 2, VKO / 4 ir 4a / 6a 10 μl TE-buferio reakcijos mišiniais. b) teigiamą PGR (K + 1b / 3a) kontrolę mėgintuvėlyje su reakcijos mišiniu "1b / 3a" įpilama 10 μl OBcdna HCV genotipo 1b / 3a; c) teigiama PGR (K + 1a / 2) kontrolė mėgintuvėlyje su reakcijos mišiniu "1a / 2" įpilama 10 μl OTP cdna HCV genotipų 1a / 2; d) teigiama PGR reakcija (K + VKO / 4) mėgintuvėlyje su reakcijos mišiniu VKO / 4, įpilama 10 μl PKO cdna HCV VKO / 4 genotipo; e) teigiamą PGR (K + 5a / 6) kontrolę mėgintuvėlyje su reakcijos mišiniu "5a / 6", įpilama 10 μl OTP cdna HCV genotipų 5a / 6. B. Pagreitinimo atlikimas nustatant "realaus laiko" režimą 1. Programuokite instrumentą (stiprintuvą su aptikimo sistema "realaus laiko" režimu), kad atliktumėte atitinkamą stiprinimo programą ir nustatytumėte fluorescencinį signalą "AmpliSens-1" (žr. 5, 6, ) 5 lentelė 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 21 iš 32

22 "FRT FORMAT" Programos "Amplisens-1" rotaciniams įrenginiams 8 Temperatūra, trukmė Matuojama kiekio trukmė Laikymo / laikymo ciklų fluorescencijos stadijos C min. 1 Temperatūros 95 5 s Dviračių sportas / 5 Važiavimas dviračiu 95 5 s Dviračių sportas 2 / FAM / Žalias, 40 Cycle 2 JOE / Yellow s Table 6 AmpliSens-1 programa planšetinio tipo prietaisams 9 ir Smart Cycler II (Cepheid, JAV) Žingsnio temperatūra, trukmė Matuojamas C ciklo fluorescencijos etape min (900 s 10 s) s 95 5 sekundes su FAM, JOE / HEX / Cy su 2. Įdėkite vamzdžius į prietaiso reakcijos modulio ląsteles. 3. Pradėkite amplifikacijos programos vykdymą, nustatydami liuminescencinį signalą. 4. Programos pabaigoje tęskite rezultatų analizę ir aiškinimą. ANALIZĖ IR REZULTATŲ AIŠKINIMAS Rezultatų analizė atliekama naudojant programinę įrangą, naudojamą PCR c nustatymui "realiuoju laiku". Fluorescencijos signalo kaupimosi kreivės yra analizuojamos FAM fluoroforos (ar panašios) kanalui ir kanalui JOE fluoroforui (ar panašiam). Rezultatai interpretuojami remiantis 8 (pvz., Rotor-Gene 3000 arba 6000 (Corbett Research, Australia), Rotor-Gene Q (Qiagen, Vokietija) buvimu (ar nebuvimu). 9 Pavyzdžiui, riedlentė iq5 (Bio-Rad, JAV); Mx3000P, Mx3005 (Stratagenas, JAV); "DT-96" ("DNR-Technologija", Rusija) ir rekomendavo šio vaistinio preparato rinkinio naudojimo rekomendacijose "Rospotrebnadzor" Centrinio mokslinių tyrimų instituto Epidemiologijos FBUN. 10 "Smart Cycler II" prietaisui (Cepheid, JAV). 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 22 iš 32

FLT taško kreivės susikirtimo FRT FORMA su slenksčio linija, nustatyta atitinkamu lygiu, lemia šio bandinio cdna buvimo (arba nebuvimo) reikšmę ribinio ciklo Ct reikšmę atitinkamoje lentelėje rezultatų lentelėje. Kanalo amplifikacijos rezultatas laikomas teigiamu, jei fluorescencijos kreivė turi tipišką S-formos išvaizdą realaus laiko PGR, kai kerta slenkstinę liniją reikšmingo fluorescencijos padidėjimo srityje, yra neigiama, jei nėra tipinės kreivės ir nėra susikirtimo su slenkstinės linijos (be Ct vertės arba CP) ir abejotina visais kitais atvejais. 7 lentelėje rodomi kanalai, pagal kuriuos HCV genotipai nustatomi kiekvienam reakcijos mišiniui. Lentelė 7 Reakcijos mišinys "1b / 3a" "1a / 2" "VKO / 4" "5a / 6 11" Kanalo aptikimo genotipas HCV FAM / Žalioji 1b 1a VKO 5a JOE / HEX / Geltona / Cy3aa Rezultatų užregistravimas kontroliniame mėginyje Rezultatai PGR tyrimai yra laikomi patikimais, jei gaunami teisingi rezultatai, kai praeina kontroliniai mėginiai pagal kontrolės reakcijų rezultatų vertinimo lentelę (žr. 8 lentelę). 11 Į PCR rinkinį įtrauktas variantas FRT-g1-6. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 23 iš 32

24 FRT FORMATAS Reakcijos mišinys Valdymas OK K K + 1b / 3a Rezultatai įvairiems PCR tyrimo etapams. FAM / Žalias Nr. Ct vertė Trūkstama Ct vertė Žemiau ribinės vertės lentelė 8 "1b / 3a" "1a / 2" "BKO / 4 "5a / 6" 12 JOE / HEX / Geltonojo / Cy3 kanalo FAM / Žalias JOE / HEX / Geltona / Cy3 FAM / Žalias JOE / HEX / Geltonas / Cy3 FAM / Žalias JOE / HEX / Geltonas / Cy3 Trūkstama vertė Ct Trūkstama Ct vertė Prie ribinės reikšmės K + 1a / 2 * * Trūksta Ct vertės Trūkstama Ct vertė Trūkstama Ct vertė Trūkstama Ct vertė Prie ribinės vertės Trūkstama Ct vertė Trūksta Trūksta Ct vertės Nėra Ct reikšmės Nėra Ct vertės Nėra Ct reikšmės Nėra Ct vertės Nėra Ct vertės * * * * * * Žemiau ribinės vertės Po K + Vko ribine verte / 4 * * * * * * * * Žemiau ribinės vertės Po K vertės ribine verte + 5a / 6 * * * * * * * Šis reakcijos mišinys nėra išbandytas. * * Žemiau ribinės vertės DĖMESIO! Ct ribinės vertės nurodytos į PCR rinkinį. Rezultatų užregistravimas tirtuose klinikiniuose mėginiuose. Virš ribinės vertės. Šiame mėginyje esantis HCV genotipas nustatomas lyginant amplifikacijos rezultatus trimis (PCR rinkinio FRT-g1-4 variantui) arba keturiais vamzdeliais (PCR rinkinys parinktis FRT-g1-6) pagal lentelę. 7, be to: a) Jei bandinio atveju nustatoma Ct vertė, atitinkanti vieną HCV RNR genotipą, rezultatas yra "genotipas"; b) Jei rezultatų lentelėje yra nustatytos dvi ar daugiau Ct vertės, tada išduodamas dvigubas, trigubas ir tt genotipas. Išimtis yra tokia atvejis: jei VKO / 4 reakcijos mišinio bandinio Ct vertės nustatomos per JOE / HEX / Yellow / Cy3 kanalą (4 HCV genotipas) ir 1b / 3a reakcijos mišinyje FAM / Žaliame kanale (1b HCV), o 4-osios genotipo Ct vertė yra 10 ar daugiau ciklo pirmojo genotipo daugiau nei 10 Ct, tada 12 PGR-g1-6 variantas įtrauktas į PCR rinkinį. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 24 iš 32

25 FRT FORMAT yra "4 genotipo" rezultatas. 2. Jei mėginio rezultatų lentelėje Ct vertė nustatoma tik CTP (reakcija CTP / 4, kanalo FAM / žalia) ir ji yra mažesnė už įterptoje nurodytą ribinę vertę, rezultatas yra "HCV genotipas nenustatytas". Be to, jei žinoma, kad HCV RNR koncentracija šiame mėginyje atitinka analitinį reagentų rinkinio jautrumą, gaunamas rezultatas: "HCV genotipas nėra nustatytas dėl mažo viruso kiekio". 3. Jei mėginių rezultatų lentelėje nėra visų genotipų Ct rezultatų, ASD Ct reikšmė (per FAM kanalą PCV mišiniuose-1-FRT HCV EKO / 4 genotipas) nėra apibrėžta arba viršija ribas (nurodytas įterptinėje), Reikia pakartoti šio mėginio PGR tyrimą, pradedant nuo RNR ekstrahavimo stadijos. DĖMESIO! 1. Jei Ct vertė mažiausiai viename bandinyje, turinčiame teigiamą PGR etapo (K + 1b / 3a, K + 1a / 2, K + VKO / 4 arba K + 5a / 6) kontrolę, viršija ribinę vertę, nurodytą įdėkloje, arba jos nėra, būtina pakartokite visų mėginių PGR testą, pradedant ekstrakcijos pakopa. 2. Jei neigiama RNR (OC) ekstrahavimo kontrolė bent viename iš reakcijos mišinių "1b / 3a", "1a / 2", "5a / 6" palei bet kurį kanalą ir (arba) reakcijos mišinį "VKO / 4" "Pastebėtas teigiamas signalas JOE / HEX / Yellow / Cy3 kanale, būtina pakartoti PGR tyrimą visiems mėginiams, kuriems HCV genotipas buvo nustatytas šiame reakcijos mišinyje, pradedant nuo RNR ekstrahavimo pakopos. 3. Jei dėl neigiamo PCR valdymo (K) teigiamas signalas nustatomas bet kuriame reakcijos mišinyje palei bet kurį kanalą, būtina pakartoti PGR tyrimą visiems mėginiams, kuriems šiame reakcijos mišinyje buvo nustatytas HCV genotipas, pradedant nuo RNR ekstrahavimo pakopos. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 25 iš 32

26 TINKAMUMO LAIKAS, TRANSPORTO SĄLYGOS IR LAIKYMO SĄLYGOS Galiojimo data. 12 mėnesių Pasibaigęs reagento rinkinys netaikomas. Neatidarytų reagentų tinkamumo laikas atitinka neatidarytų reagentų etiketėse nurodytą tinkamumo laiką, nebent instrukcijose būtų nurodyta kitaip. Transportas Reagentų rinkinys turi būti vežamas 2-8 ° C temperatūroje ne ilgiau kaip 5 dienas. Gavusi, išardykite pagal nurodytas saugojimo temperatūras. Sandėliavimas REVERTA-L ir "PCR kit" reagentų komplektai, išskyrus OKO, TE-buferį ir CTP STI-248-rec., Turi būti laikomi "RIBO-sorbų" ir "RIBO-prep" reagentų rinkiniuose esant 2-8 ° C temperatūrai. laikomi ne aukštesnėje nei -16 ° C temperatūroje. "PCR rinkinys" turi būti laikomas 2-8 ° C temperatūroje. EYE, TE-buferis ir CTP STI-248-rec turi būti laikomi 2-8 ° C temperatūroje. 1b / 3a PCR mišinio-1-FRT HCV genotipai, HCV PCR mix-1-FRT genotipai 1a / 2, HCV BKO / genotipas PCR mišinys-1-FRT HCV / genotipas 4 ir PCR mišinys-1-FRT HCV genotipas 5a / 6 turi būti laikomi tamsioje vietoje. Atostogos sąlygos. Gydymo-profilaktikos ir sanitarijos įstaigoms. Skundai dėl "AmpliSense HCV-genotipo-FL" reagentų komplekto kokybės turi būti siunčiami Federalinės mokslinių tyrimų ir plėtros instituto Epidemiologijos "Rospotrebnadzor" (Maskva, Novogireevskos g. 3a) gamykloje melioracijos ir mokymo skyriuje (495), faksas (495). Galite palikti atsiliepimus ir pasiūlymus apie "AmpliSense" produktus, užpildydami vartotojų anketą svetainėje: 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 26 iš 32

27 RNR EKSTRAKAVIMO PRIEDAS 1. RNR ekstrahavimas naudojant RIBO sorbų reagentų rinkinį. Procedūra 1. Tirpalo tirpalas ir plovimo tirpalas 1 (jei laikomas 2-8 ° C temperatūroje) pašildomas 60 ° C temperatūroje, kol kristalai visiškai ištirps. 2. Pasirinkite reikiamą 1,5 ml vienkartinių tūbelių skaičių (įskaitant neigiamą ekstrahavimo kontrolę). Ženklinkite vamzdelius. 3. Kiekvieno mėgintuvėlio apačioje įpilkite 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Į mėgintuvėlius įpilkite 450 μl lizuojančio tirpalo. Ženklinkite vamzdelius. Pastaba. Norint palengvinti atrankos procedūrą, didelį mėginių kiekį leidžiama sumaišyti atskirame lizės tirpalo buteliuke ir CTP STI-248-rec (vienam mėginiui, 450 μl tirpalo tirpalo ir 10 μl CTP STI-248-rec), po to atskiriama 450 μl mišinio iš anksto paruoštuose 1,5 ml mėgintuvėliuose. 5. Bandymo mėgintuvėliuose su lizavimo tirpalu ir ASD 100 μl kiekvieno mėginio imami naudojant filtrus. Neigiamos kontrolės (OK) ekstrahavimo mėgintuvėlyje pridedama 100 μl Neigiamos kontrolės. 6. Tvirtai uždarytus mėginius reikia kruopščiai sumaišyti su sūkuriu ir centrifuguoti 5 s greičiu 5 000 apsisukimų per minutę mikrocentrifugoje, kad būtų pašalinti lašai iš vamzdelio dangtelio vidinio paviršiaus. 7. Atsargiai suspauskite sorbentą, sukratydami. Į kiekvieną mėgintuvėlį su atskiru antgaliu įpilama 25 μl resuspenduoto sorbento. 8. Tirpinkite mėgintuvėlių turinį sūkuriu ir 10 minučių palikite kambario temperatūroje, kruopščiai sumaišykite kas 2 minutes. 9. Centrifuguoti mikrocentrifugavimo mėgintuvėlius 1 minutėje 7 tūkst. G (pvz., 10 tūkst. Aps./min. "MiniSpin", "Eppendorf" centrifuga). 10. Iš kiekvieno mėgintuvėlio nuimkite supernatantą su atskira galva, naudojant vakuuminį siurblį. 11. Į vamzdelius įpilkite 400 μl skalbimo tirpalo. 1. Išsiurbkite, kol sorbentas visiškai suspensijos. Centrifuguoti mėgintuvėlius mikrocentrifuga 7 tūkst. G 1 min. Pasirinkite supernatant 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / 27 psl. Iš 32

28 RNR EKSTRAVIMAS iš kiekvieno vamzdelio su atskira galva naudojant vakuuminį siurblį. 12. Į vamzdelius įpilkite 500 μl skalbimo tirpalo. 3. Išsiurbkite, kol sorbentas bus visiškai suspensuotas. Centrifuguoti mėgintuvėlius mikrocentrifuga 7 tūkst. G 1 min. Iš kiekvieno mėgintuvėlio nuimkite 3 skalbimo tirpalą su atskiru antgaliu, naudojant vakuuminį siurblį. 13. Į mėgintuvėlį įpilkite 400 μl plovimo tirpalo. 4. Sukratykite, kol sorbentas visiškai suspensijos. Centrifuguoti mėgintuvėlius mikrocentrifuga 7 tūkst. G 1 min. Iš kiekvieno vamzdelio visiškai išskalvkite skalbimo tirpalą 4 su atskiru antgaliu, naudojant vakuuminį siurblį. 14. Išdžiovinkite sorbentą, atidarę mėgintuvėlius su atviromis dangteliais termostatu 60 ° C temperatūroje 15 minučių. 15. Atstovuokite sorbentą 50 μl RNR buferio. Šiluma į termostatą 60 ° C temperatūroje 2 minutes, sumaišoma su sūkuriu ir nuosekliai nusodina sorbentą centrifuguje, esant 12 000 g (pvz., Minutėmis MiniSpin, Eppendorf centrifuga) minutę 1 minutę. DĖMESIO! Gautas RNR preparatas negali būti laikomas, atvirkštinės transkripcijos reakcija turėtų būti atliekama iškart po RNR mėginio gavimo. Reikia labai atsargiai parinkti RNR tirpalą, neužkrėsdamas sorbento. Jei sorbentas yra maišomas, jį reikia nusodinti centrifuga. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 28 iš 32

29 RNR EKSTRAKTACIJOS PRIEDAS 2. RNR ekstrahavimas naudojant RIBO prep reagento rinkinį. Procednjra 1. Tirpalo tirpalas (jei jis buvo laikomas 2-8 ° C temperatūroje) kaitinamas iki 65 ° C temperatūros iki pilno kristalų išsilydo. 2. Pasirinkite reikiamą 1,5 ml vienkartinių tūbelių skaičių (įskaitant neigiamą ir teigiamą ekstrahavimo kontrolę). 3. Kiekvieno mėgintuvėlio apačioje įpilkite 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Į tūbelę įpilkite 300 μl tirpalo tirpalo. Ženklinkite vamzdelius. Pastaba. Didelio mėginių kiekio, skirto palengvinti paskirstymo procedūrą, atskirame buteliuke įlašinamas lizės tirpalas ir CTP STI-248-rec (vienam μl mėginio, 300 μl tirpalo, skirto tirpimui, ir 10 μl CTP STI-248-rec), po to 300 μl mišinio į iš anksto paruoštą 1,5 ml tūbelę. 5. Bandymo mėgintuvėliuose su tirpalu, skirtu lizėms ir EKR, į kiekvieną mėginį įpilama 100 μl, naudojant antgalius su filtru. Neigiamos kontrolės (OK) ekstrahavimo mėgintuvėlyje pridedama 100 μl Neigiamos kontrolės. 6. Sumaišykite mėgintuvėlių turinį, centrifuguokite 5 sekundes mikrocentrifuga, kad lašeliai būtų pašalinti iš dangčio vidinio paviršiaus ir termiškai įkaitinkite 5 minutes 65 ° C temperatūroje. 7. Į mėgintuvėlius įpilkite 400 μl kritulių tirpalo, kruopščiai sumaišykite su sūkuriu. 8. Centrifuguokite mikrocentrifugavimo mėgintuvėlių, esant 12 000 g (pvz., Minutės MiniSpin, Eppendorfo centrifugai) 5 minutes. 9. Atsargiai nuvalykite supernatantas, neliečiant nuosėdų, naudojant vakuuminį siurblį ir atskirą antgalį kiekvienam bandiniui. 10. Į vamzdžius 3 įdėkite 500 μl skalbimo tirpalo, sandariai uždarykite dangčius, gerai išplaukite nuosėdas, 3-5 kartus keiskite vamzdelius. Visoms vamzdžiams vienu metu galima atlikti procedūrą. Tam reikia padengti vamzdelius lentynose su dangteliu ar kitu stovu ant viršaus, paspauskite juos ir pasukite trikojį. 11. Centrifuguokite 12 tūkst. G per 1-2 minutes mikrocentrifugoje. 12. Atsargiai, neužfiksuojant nuosėdų, paruoškite supernatantą, 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 29 psl. Iš 32

30 RNR EXTRACTION naudojant vakuuminį siurblį ir atskirą antgalį kiekvienam bandiniui. 13. Į mėgintuvėlius įpilkite 200 μl plovimo tirpalo 4, sandariai uždarykite dangčius ir atsargiai nuskalaujate nuosėdas, 3-5 kartus keiskite vamzdelius. Visoms vamzdžiams vienu metu galima atlikti procedūrą. Tam reikia padengti vamzdelius lentynose su dangteliu ar kitu stovu ant viršaus, paspauskite juos ir pasukite trikojį. 14. Centrifuguokite 12 tūkst. G 2 min. Mikrocentrifuga. 15. Atsargiai, nenaudojant nuosėdų, kruopščiai paruoškite supernatantą, naudodami vakuuminį siurblį ir atskirą kiekvieno mėginio antgalį. 16. Talpykimės termostatu 65 ° C temperatūroje 5 minutes, kad išdžiovintumėte nuosėdas (reikia atidaryti vamzdžių gaubtus). 17. Į vamzdelius įpilkite 50 μl RNR buferio. Maišykite sūkurį. 5 minučių pastumkite į termostatą 65 ° C temperatūroje, kartais maišydami sūkuriu. 18. Mikrocentrifuga centrifuguoti mėgintuvėlius po 12 tūkstančių g per 1 min. Supernatantas yra išvalytos RNR. Mėginiai paruošti reversinės transkripcijos ir PGR reakcijos formulavimui. DĖMESIO! Gautas RNR preparatas negali būti laikomas, atvirkštinės transkripcijos reakcija turėtų būti atliekama iškart po RNR mėginio gavimo. 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / puslapis 30 iš 32

31 SIMBOLIAI, NAUDOJAMI SPAUSDINAMOJO PREKĖJE Katalogo numeris Partijos kodas Dėmesio! Žiūrėkite lydimąją dokumentaciją. Didžiausias bandymų skaičius Produktas in vitro diagnostikai Naudokite iki pakeitimo datos Temperatūros riba Viršutinė temperatūros riba Žiūrėkite naudojimo instrukciją Avozkite tiesioginių saulės spindulių Gamybos data Gamintojas 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 31 iš 32

32 Rev. LA IvI Kur atlikti pakeitimus Footer Footer Pakeitimų esmė Pakeitimų esmė Įdiegto katalogo numeris R-V1-G (1-4) - 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) formos konfigūracijai 3 Pašalinti katalogų numeriai formų konfigūracijoms 1 ir 4 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / 32 puslapis iš 32

Amplisens hcv fl

loading...
Hepatito etapai c
Mpiviropack Price

Viskas apie hepatito C

loading...

Gydymas, simptomai, narkotikai

Hepatitas su rna amplicens hcv fl

loading...

Hepatitas su rna amplicens hcv fl

loading...

Hepatitas yra ūminė ir lėtinė kepenų uždegiminė liga, kuri nėra židinio, bet plačiai paplitusi. Skirtinguose hepatituose infekcijos metodai yra skirtingi, jie taip pat skiriasi ligos progresavimo greičiu, klinikinėmis apraiškomis, gydymo metodais ir prognozėmis. Netgi skirtingų hepatito tipų simptomai yra skirtingi. Be to, kai kurie simptomai pasirodo stipresni už kitus, o tai priklauso nuo hepatito tipo.

Pagrindiniai simptomai

loading...
  1. Geltona Simptomas yra dažnas ir dėl to, kad bilirubinas patenka į paciento kraują, jei yra kepenų pažeidimas. Kraujas, cirkuliuojantis per kūną, skleidžia jį per organus ir audinius, dažydamas juos geltonai.
  2. Skausmo atsiradimas dešinėje hipochondrijoje. Tai atsiranda dėl padidėjusio kepenų dydžio, dėl kurio atsiranda skausmas, kuris yra nuobodus ir pailgėjęs, arba yra paroksizmas.
  3. Sveikatos pablogėjimas kartu su karščiavimu, galvos skausmais, galvos svaigimu, virškinimo sutrikimu, mieguistumu ir letargumi. Visa tai yra dėl bilirubino organo veikimo pasekmė.

Ūminis ir lėtinis hepatitas

loading...

Hepatito sergantiems pacientams yra ūminės ir lėtinės formos. Esant ūmiam formavimui, jie pasireiškia kepenų pažeidimo virusais atveju, taip pat, jei buvo apsinuodijami įvairios rūšies nuodai. Ūminėse ligos formose pacientų būklė labai greitai pablogėja, o tai padeda paspartinti simptomų atsiradimą.

Su šia ligos forma yra gana įmanoma palankios prognozės. Išskyrus tai, kad ji tampa lėna. Ūminėje formoje liga yra lengvai diagnozuota ir lengviau gydoma. Neapdorotas ūmus hepatitas lengvai išsivysto į lėtinės formos. Kartais su sunkiu apsinuodijimu (pavyzdžiui, alkoholiu) lėtinė forma atsiranda atskirai. Dėl lėtinės hepatito formos atsiranda kepenų ląstelių keitimasis su jungiamuoju audiniu. Jis yra silpnas išreikštas, lėtas, todėl kartais išlieka nenustatytas iki kepenų cirozės pradžios. Lėtinis hepatitas yra blogesnis, o jo išgydymo prognozė yra mažiau palanki. Ūminio ligos progreso metu būklė blogėja, susirgiuoja gelta, atsiranda intoksikacijos, sumažėja funkcinė kepenų funkcija, padidėja bilirubino kiekis kraujyje. Su laiku nustatant ir veiksmingai gydant ūmus hepatitas, pacientas dažniausiai atsigauna. Jei ligos trukmė viršija šešis mėnesius, hepatitas tampa lėtinis. Lėtinė ligos forma sukelia rimtus sutrikimus organizme - padidėja blužnis ir kepenys, trikdoma medžiagų apykaita, atsiranda komplikacijų, tokių kaip kepenų cirozė ir onkologinės formacijos. Jei pacientas sumažino imunitetą, gydymo režimas nėra teisingas arba yra priklausomybė nuo alkoholio, tada perėjimas prie lėtinės formos hepatito kelia grėsmę paciento gyvenimui.

Hepatito veislės

loading...

Hepatitas turi keletą tipų: A, B, C, D, E, F, G, jie taip pat vadinami virusiniu hepatitu, nes jų atsiradimo priežastis yra virusas.

Šio tipo hepatitas taip pat vadinamas Botkino liga. Ji turi inkubacinį laikotarpį nuo 7 iki 2 mėnesių. Jo ligos sukėlėjas, RNR virusas, gali būti perduodamas iš ligonio į sveiką žmogų, naudojant žemos kokybės produktus ir vandenį, susisiekiant su paciento naudojamais buities daiktais. Hepatitas A yra įmanomas trimis formomis, jie suskirstomi pagal ligos pasireiškimo stiprumą:

  • ūminė forma su gelta, kepenys yra rimtai pažeista,
  • su subakiu be gelta, galime kalbėti apie lengvesnę ligos versiją,
  • subklinikine forma gali net nepastebėti simptomų, nors virusas yra užkrėstas asmuo ir gali užkrėsti kitus.

Ši liga taip pat vadinama serumo hepatitu. Pridedamas kepenų ir blužnies padidėjimas, sąnarių skausmas, vėmimas, temperatūra, kepenų pažeidimas. Tai atsiranda arba ūminėje, arba lėtinės formos, kurią lemia paciento imuniteto būklė. Infekcijos būdai: per injekcijas, pažeidžiančias sanitarines taisykles, lytinius santykius, kraujo perpylimo metu, blogai dezinfekuotų medicinos prietaisų naudojimas. Inkubacijos laikotarpis yra 50-180 dienų. Skiriant vakcinaciją, hepatito B dažnis sumažėja.

Ši ligos rūšis yra viena iš rimčiausių ligų, nes ji dažnai būna kartu su ciroze ar kepenų vėžiu, vėliau sukelianti mirtį. Liga yra blogai gydoma, be to, hepatitui C vieną kartą, žmogus gali būti pakartotinai užkrėstas tuo pačiu negalavimu. HCV išgydyti nėra lengva: po ūminės hepatito C ligos 20 proc. Pacientų atsigauna, o 70 proc. Pacientų organizmas negali išgydyti viruso, o liga tampa lėtinė. Nustatyti priežastis, dėl kurios kai kurie išgydomi patys, o kiti nėra, dar nepavyko. Lengva hepatito C forma neišnyks, todėl ją reikia gydyti. Ūminės HCV formos diagnozę ir gydymą atlieka užkrečiamųjų ligų specialistas, lėtinė ligos forma yra hepatologas ar gastroenterologas. Per infuzuotą donorą kraujo ar kraujo perpylimo metu gali būti užsikrėtę, naudojant seksualiai netinkamos kokybės medicinos priemones, o ligonio mama perduoda infekciją vaikui. Hepatito C virusas (HCV) sparčiai plinta visame pasaulyje, pacientų skaičius jau seniai viršijo pusantro šimto milijonų žmonių. Anksčiau HCV gerai neatspindi terapijos, tačiau dabar liga gali būti išgydyta naudojant modernius tiesioginio veikimo antivirusinius metodus. Tik ši terapija yra gana brangi, todėl ne kiekvienas gali sau leisti.

Šis hepatito D tipas yra įmanomas tik tada, kai jis yra kartu su hepatito B virusu (koinfekcija yra infekcija, kai vienos ląstelės yra su skirtingų tipų virusais). Jis lydi didžiuliu kepenų pažeidimu ir ūmine ligos eiga. Infekcijos būdai - tai, kaip ligos virusas patenka į sveiko žmogaus kraują iš viruso nešlio ar ligonio. Inkubacijos laikotarpis trunka nuo 20 iki 50 dienų. Iš išorės, ligos eiga panašus į hepatitą B, tačiau jo forma yra sunkesnė. Gali tampa lėtinis, vėliau važiuodamas ciroze. Galima atlikti skiepijimą, panašų į tą, kuris naudojamas hepatitui B.

Šiek tiek primenamas hepatitas A, perduodamas per kepenis ir mechanizmą, nes jis taip pat perduodamas per kraują. Jos bruožas yra žaibiškų formų atsiradimas, sukeliantis mirtį ne ilgiau kaip 10 dienų. Kitais atvejais tai gali būti veiksmingai išgydoma, o atsigavimo prognozė dažnai yra palanki. Išimtis gali būti nėštumas, nes vaiko praradimo rizika yra beveik 100%.

Šio tipo hepatitas nėra pakankamai ištirtas. Žinoma, kad ligą sukėlė du skirtingi virusai: vienas buvo izoliuoti iš donorų kraujo, antrasis buvo paciento išmatose, kuriam po kraujo perpylimo buvo hepatitas. Ženklai: gelta, karščiavimas, ascitas (skysčių susikaupimas pilvo ertmėje), kepenų ir blužnies padidėjimas, bilirubino ir kepenų fermentų koncentracijos padidėjimas, šlapimo ir išmatų pokyčių atsiradimas bei bendras kūno apsinuodijimas. Veiksmingi hepatito F gydymo metodai dar nėra sukurti.

Šio tipo hepatitas yra panašus į hepatitą C, tačiau jis nėra toks pavojingas, nes jis nedaro įtakos cirozės ir kepenų vėžio atsiradimui. Cirozė gali pasireikšti tik tuo atveju, jei kartu užsikrečia hepatitas G ir C.

Diagnostika

loading...

Po jų simptomų, virusinis hepatitas yra panašus vienas į kitą, kaip ir kai kurios kitos virusinės infekcijos. Dėl šios priežasties sunku tiksliai diagnozuoti pacientą. Todėl, siekiant išsiaiškinti hepatito rūšį ir teisingą gydymo paskirtį, laboratoriniai kraujo tyrimai reikalingi norint nustatyti kiekvieno tipo viruso rodiklius. Nustatę tokių žymenų buvimą ir jų santykį, galima nustatyti ligos stadiją, jos aktyvumą ir galimus padarinius. Siekiant stebėti proceso dinamiką, po tam tikro laiko egzaminas pakartojamas.

Kaip gydyti hepatitu C

loading...

Dabartinis gydymo režimas lėtinėms HCV formoms yra sumažintas iki kombinuotojo antivirusinio gydymo, įskaitant tiesioginio veikimo antivirusinius vaistus, tokius kaip sofosbuviras, velpatasviras, daklataksviras ir ledipasviras įvairiuose deriniuose. Kartais ribavirinas ir interferonai pridedami siekiant padidinti jų efektyvumą. Šis veikliųjų medžiagų derinys sustabdo virusų replikaciją, taupant kepenis nuo jų destrukcinio poveikio. Ši terapija turi keletą trūkumų:

  1. Vaistų kaina kovai su hepatito B virusu yra didelė, ne visi gali juos gauti.
  2. Atskirų vaistų priėmimas yra kartu su nemalonu šalutiniu poveikiu, įskaitant karščiavimą, pykinimą, viduriavimą.

Lėtinio hepatito formų gydymo trukmė trunka nuo kelių mėnesių iki metų, priklausomai nuo viruso genotipo, kūno pakenkimo laipsnio ir vartojamų vaistų. Kadangi hepatitas C pirmiausia veikia kepenis, pacientai privalo laikytis griežtos dietos.

HCV genotipų charakteristikos

loading...

Hepatitas C yra vienas pavojingiausių virusinių hepatitų. Liga sukėlė RNR turintis virusas, vadinamas Flaviviridae. Hepatito C virusas taip pat vadinamas "švelniu žudiku". Jis gavo tokį nepakartojamą epitetą dėl to, kad pradiniame etape liga nėra jokių simptomų. Nėra klasikinės gelta požymių, ir nėra jokio skausmo į dešinę hipochondrijos sritį. Aptikti viruso buvimą galima ne anksčiau kaip po poros mėnesių po infekcijos. Ir prieš tai imuninės sistemos reakcija visiškai nėra ir žymenys kraujyje negali būti aptikti, todėl genotipų neįmanoma atlikti. Ypatinga HCV savybė taip pat yra tai, kad po to, kai reprodukcijos procesas patenka į kraują, virusas pradeda greitai mutacijos. Tokios mutacijos trukdo užsikrėtimo imuninei sistemai prisitaikyti ir kovoti su liga. Dėl to liga gali trukti kelerius metus be jokių simptomų, po kurios cirozė ar piktybinis auglys atsiranda beveik be liekanos. Ir 85% atvejų, liga nuo ūminės formos tampa lėtinė. Hepatito C virusas turi svarbią savybę - įvairios genetinės struktūros. Iš tikrųjų hepatitas C yra virusų rinkinys, klasifikuojamas pagal jų struktūros variantus ir suskirstytas į genotipus ir potipius. Genotipas yra genų, koduojančių paveldimus požymius, suma. Iki šiol medicinoje žinomi 11 hepatito C viruso genotipų, turinčių savo potipius. Genotipas yra žymimas skaičiais nuo 1 iki 11 (nors klinikiniais tyrimais genotipai dažniausiai naudojami 1 ÷ 6), o potipiai - lotyniškos abėcėlės raidėmis:

Skirtingose ​​šalyse HCV genotipai skirstomi įvairiais būdais, pavyzdžiui, Rusijoje, dažniausiai jie gali būti randami iš pirmojo iki trečiojo. Ligos sunkumas priklauso nuo genotipo tipo, nustatomas gydymo režimas, jo trukmė ir gydymo rezultatas.

Kaip HCV štamai plinta visoje planetoje

loading...

Pasaulio teritorijoje hepatito C genotipai paskirstomi nevienodai, dažniausiai genotipai 1, 2, 3 gali būti randami, o atskirose teritorijose tai atrodo taip:

  • Vakarų Europoje ir jos rytiniuose regionuose dažniausiai yra 1 ir 2 genotipai.
  • JAV, 1a ir 1b potipiai,
  • Šiaurinėje Afrikoje labiausiai paplitęs 4 genotipas.

Galimo HCV infekcijos pavojus yra žmonės, kurių kraujo sutrikimai (kraujo kūnelių navikai, hemofilija ir tt), taip pat pacientai, kuriems gydomi dializės vienetai. 1 genotipas yra laikomas labiausiai paplitęs pasaulyje, dėl kurio jis yra

50% visų atvejų skaičiaus. Antrasis dažniausiai yra 3 genotipas, šiek tiek daugiau nei 30%. HCV paplitimas visoje Rusijoje labai skiriasi nuo pasaulio ar Europos versijų:

  • genotipas 1b

50% atvejų

  • 3a genotipas

    20%

  • hepatitas 1a infekuotas

    10% pacientų

  • hepatitas su 2 genotipu rasti

    Tačiau ne tik HCV gydymo sunkumai priklauso nuo genotipo. Toliau išvardyti veiksniai taip pat turi įtakos gydymo veiksmingumui:

    • pacientų amžius. Galimybė išgydyti jauniems yra daug didesnė
    • moterys lengviau atsigauti nei vyrai
    • svarbus kepenų pažeidimo laipsnis - palankus rezultatas yra didesnis, mažiau žalos,
    • viruso apkrovos dydis - kuo mažesnis virusas organizme gydymo metu, tuo efektyvesnis gydymas,
    • paciento svoris: kuo didesnis, tuo sudėtingesnis yra gydymas.

    Todėl gydymo režimą pasirenka gydantis gydytojas, atsižvelgdamas į pirmiau išvardytus veiksnius, genotipą ir EASL (Europos Kepenų ligų asociacijos) rekomendacijas. EASL nuolat nuolat atnaujina savo rekomendacijas ir, kaip pasirodo nauji veiksmingi vaistai hepatito C gydymui, ištaisykite rekomenduojamus gydymo būdus.

    Kas serga HCV infekcija?

    loading...

    Kaip žinoma, hepatito C virusas perduodamas per kraują, todėl labiausiai tikėtina, kad jis užsikrečia:

    • transfuzijos pacientai
    • pacientai ir klientai stomatologijos įstaigose ir medicinos įstaigose, kuriose netinkamai sterilizuojamos medicinos priemonės,
    • dėl nesterilių priemonių gali būti pavojinga aplankyti nagų ir grožio salonus,
    • Auskarų vėrimas ir tatuiruočių mėgėjams taip pat kenčia nuo blogai apdorotų priemonių,
    • yra didelė infekcijos rizika tiems, kurie vartoja narkotikus dėl pakartotinio nesterilių adatų vartojimo,
    • vaisius gali būti užkrėstas hepatitu C užsikrėtus motina,
    • per lytinius santykius, infekcija taip pat gali patekti į sveiko žmogaus kūną.

    Koks yra hepatito C gydymas?

    loading...

    Dėl hepatito C viruso buvo "lengvas" žudikas. Jis gali neparodyti metų, po kurio jis staiga atsiranda kaip komplikacijų, kartu su ciroze ar kepenų vėžiu. Galų gale daugiau nei 177 milijonai žmonių pasaulyje diagnozavo HCV. Gydymas, kuris buvo naudojamas iki 2013 m., Kartu su inetferferono ir ribavirino injekcijomis pacientams suteikė galimybę gydyti ne daugiau kaip 40-50%. Be to, tai lydėjo rimtas ir skausmingas šalutinis poveikis. Situacija pasikeitė 2013 m. Vasarą, kai JAV farmacijos kompanija "Gilead Sciences" patentuota medžiagai "sofosbuviras", kuri buvo pagaminta kaip vaistas pagal prekės pavadinimą Sovaldi, į kurią įeina 400 mg vaisto. Jis tapo pirmuoju tiesiogiai veikiančiu antivirusiniu vaistu (DAA) kovai su HCV. Klinikinių tyrimų, atliktų su sofosbuviru, rezultatai palankiai įvertino gydytojus, kurie, priklausomai nuo genotipo, pasiekė 85-95%, o gydymo kursas, palyginti su gydymu interferonais ir ribavirinu, išaugo daugiau nei dvigubai. Ir nors farmacinė kompanija Gilead patentuota sofosbuvirui, 2007 m. Ją sintezavo Michael Sofia, Pharmasett darbuotojas, vėliau įsigytas "Gilead Sciences". Nuo Michaelio vardo jo sintezė medžiaga vadinama sofosbuviru. Pats Michaelas Sofija kartu su mokslininkų grupe, kuri padarė keletą atradimų, kurie atskleidė HCV pobūdį ir leido jam sukurti veiksmingą vaistą jo gydymui, gavo Lasker-DeBakey premiją už klinikinius medicininius tyrimus. Na, beveik visas pelnas iš veiksmingo naujo produkto pardavimo nusileido Gileadui, kuris nustatė monopolistai aukštas Sovaldos kainas. Be to, bendrovė apgynė savo plėtrą specialiu patentu, pagal kurį "Gilead" ir kai kurios jos partnerės bendrovės tapo išskirtinės teisės gaminti originalias DAA savininkes. Dėl to "Gilead" pelnas per pirmuosius dvejus narkotikų pardavimo metus pakartotinai padengė visas išlaidas, kurias bendrovė patyrė įsigydama "Pharmasett", gaudama patentus ir vėlesnius klinikinius tyrimus.

    Kas yra sofosbuviras?

    loading...

    Šio narkotiko veiksmingumas kovojant su HCV buvo toks didelis, kad dabar beveik jokio gydymo režimo negalima vartoti. Sofosbuvir nerekomenduojama vartoti kaip monoterapijos, tačiau, vartojant kartu, jis rodo labai gerus rezultatus. Iš pradžių vaistas buvo vartojamas kartu su ribavirinu ir interferonu, todėl komplikuotuose atvejuose tai buvo įmanoma išgydyti tik 29 savaites. Ir tai yra nepaisant to, kad tik gydymas interferonu ir ribavirinu buvo du kartus mažiau veiksmingas ir jo trukmė kartais viršijo 40 savaičių. Po 2013 m. Kiekvienais kitais metais atsirado naujienų apie vis daugiau ir daugiau naujų vaistų, kurie sėkmingai kovoja su hepatito C virusu:

    • 2014 m. Pasirodė Daklatasviras
    • 2015 m. Buvo Ledipasvir gimimo metai,
    • 2016 m. Malonu sukurti velpatasvir.

    "Daclatasvir" buvo išleistas "Bristol-Myers Squibb" vaistu "Daklinza", kurio sudėtyje yra 60 mg veikliosios medžiagos. Gileado mokslininkai sukūrė šias dvi medžiagas, nes nė vienas iš jų nebuvo tinkamas monoterapijai, jie vartojo vaistus tik kartu su sofosbuviru. Siekiant palengvinti gydymą, atsargiai atsinaujinantys vaistai, išleidžiami nedelsiant kartu su sofosbuviru. Taigi buvo narkotikų:

    • Harvoni, sujungiant 400 mg sofosbuvirą ir 90 mg ledipasvirą
    • Epclusa, kuriame buvo 400 mg sofosbuviras ir 100 mg vipertasviras.

    Gydant daclatasviru, buvo paimti du skirtingi vaistai, Sovaldi ir Daclinai. Kiekvienas iš suporuotų veikliųjų ingredientų derinių buvo naudojamas tam tikrų HCV genotipų gydymui pagal EASL rekomenduojamus gydymo režimus. Ir tik sofosbuviras kartu su velpatasviru pasirodė pangenotipinis (universalus) būdas. "Epclus" išgydė visus hepatito C genotipus, kurių praktiškai toks pat didelis efektyvumas buvo maždaug 97 - 100%.

    Generinių vaistų atsiradimas

    loading...

    Klinikiniai tyrimai patvirtino gydymo veiksmingumą, tačiau visi šie labai veiksmingi vaistai turėjo vieną didelį trūkumą - pernelyg aukštas kainas, dėl kurių jie negalėjo įsigyti daugelio ligonių. Monopoliškai aukštos kainos Gileado įrengtiems produktams sukėlė piktnaudžiavimą ir skandalus, privertė patentų savininkus tam tikras nuolaidas, o tam tikroms bendrovėms iš Indijos, Egipto ir Pakistano leido gaminti tokius veiksmingus ir ieškomus vaistus analogus (generinius vaistus). Be to, kova su patentų savininkais, siūlanti vaistus gydyti neobjektyviai pripūstomis kainomis, paskatino Indiją, kaip šalį, kurioje milijonai pacientų, sergančių hepatitu C, gyvena lėtinės formos. Dėl šios kovos "Gilead" pirmą kartą išleido licencijas ir patentų išdavimą 11-oje Indijos kompanijose, todėl pirmą kartą buvo išleista sofosbuviras, o vėliau ir kiti nauji produktai. Gavę licencijas, Indijos gamintojai greitai pradėjo gaminti generinius vaistus, savo firminius pavadinimus priskyrę pagamintiems vaistams. Pirmiausia atsirado "Sovaldi", o Daklinza, Harvoni, Epclusa ir Indija tapo pasaulio lyderiu savo gamyboje. Pagal licencijos sutartį, Indijos gamintojai moka 7 proc. Savo pajamų patentų savininkų naudai. Tačiau net ir atlikus šiuos mokėjimus Indijoje gaminamų generinių vaistų kaina buvo dešimt kartų mažesnė nei originalių.

    Veiklos mechanizmai

    loading...

    Kaip pranešta anksčiau, besivystančios HCV gydymo schemos yra susijusios su DAA ir tiesiogiai veikia virusą. Nors anksčiau naudojamas interferonas gydomas ribavirinu, sustiprėja žmogaus imuninė sistema, padedanti organizmui pasipriešinti ligai. Kiekviena medžiaga veikia virusą savaip:

    1. Sofosbuvir blokuoja RNR polimerazę, taip slopindamas viruso replikaciją.
    1. Daclatasvir, ledipasvir ir velpatasvir yra NS5A inhibitoriai, užkertantys kelią virusų plitimui ir jų skverbimosi į sveikąsias ląsteles.

    Toks kryptinis poveikis leidžia jums sėkmingai kovoti su HCV, naudojant sofosbuvirą kartu su daklatasviru, ledipasviru, velpatasvir gydymui. Kartais, norint sustiprinti viruso poveikį, pora pridedama trečioji sudedamoji dalis, dažniausiai ribavirinas.

    Generiniai gamintojai iš Indijos

    loading...

    Šalies farmacijos įmonės pasinaudojo jai suteiktomis licencijomis, o dabar Indija išleidžia šias "Sovaldi" generines priemones:

    • Hepcvir - gamintojas Cipla Ltd.,
    • Hepcinat - Natco Pharma Ltd.
    • Cimivir - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • MyHep yra "Mylan Pharmaceuticals Private Ltd." gamintojas.
    • SoviHep - UAB "Zydus Heptiza"
    • Sofovir yra "Hetero Drugs Ltd." gamintojas.
    • Atsisakymas - parengtas Dr Reddy # 8217, s Laboratories,
    • Virso - išleido "Strides Arcolab".

    "Daklins" analogai taip pat gaminami Indijoje:

    • Natdac Natco Pharma,
    • Dacihep iš Zydus Heptiza,
    • Daclahep iš Hetero Drugs
    • Daktovinas iš "Strides Arcolab"
    • Daclawin iš Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • Mydacla iš "Mylan Pharmaceuticals".

    Po Gileado Indijos narkotikų gamintojai taip pat įgijo Harvoni gamybą, dėl to atsirado šie generiniai vaistai:

    • Ledifos - Hetero išleidimai
    • Hepcinat LP - Natco,
    • Myhep LVIR - Mylan,
    • Hepcvir L - Cipla Ltd.
    • Cimivir L - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • LediHep - Zydus.

    2017 m. Buvo įvaldyta tokia Indijos generinių vaistų Epclusi gamyba:

    • "Velpanat" išleido "Natco Pharma"
    • Velasof įsisavino Hetero Drugs
    • "SoviHep V" pradėjo gaminti įmonę Zydus Heptiza.

    Kaip matote, Indijos farmacijos įmonės neatsilieka nuo amerikiečių gamintojų, greitai greitai įvaldo naujai sukurtus vaistus, tuo pat metu gerbiant visas kokybines, kiekybines ir terapines savybes. Atsisakoma kartu su farmakokinetikos biologiniu lygiavertiškumu, palyginti su originalais.

    Bendrieji reikalavimai

    loading...

    Bendras vaistas yra vaistas, kuris gali pakeisti brangius originalius vaistus su patentu, atsižvelgiant į jo pagrindines farmakologines savybes. Jos gali būti išleistos tiek tada, kai jos yra prieinamos, tiek ir tuo atveju, kai nėra licencijos, tik jo buvimas leidžia analogiją išduoti licenciją. Licencijų išdavimui Indijos farmacijos bendrovėms "Gilead" taip pat suteikė jiems gamybos technologijas, suteikdama licencijų gavėjams teisę į nepriklausomą kainų politiką. Kad analogas vaisto būtų laikomas generiniu, jis turi atitikti keletą parametrų:

    1. Jūs turite laikytis svarbiausių farmacinių komponentų santykio rengiant kokybinius ir kiekybinius standartus.
    1. Laikykitės atitinkamų tarptautinių standartų.
    1. Privaloma laikytis tinkamų gamybos sąlygų.
    1. Paruošimuose turėtų būti išlaikytas tinkamas absorbcijos parametrų ekvivalentas.

    Verta paminėti, kad PSO pasirūpina, kad būtų užtikrinta galimybė įsigyti vaistų, kuria siekiama pakeisti brangus firminius narkotikus generuojamų biudžeto lėšomis.

    Egipto soferbuvir generics

    Skirtingai nei Indija, Egipto farmacijos įmonės netapo pasauliniais lyderiais generuojant hepatito C generinius vaistus, nors jie taip pat įgijo analogų sofosbuvirą. Tačiau dauguma jų analogų yra nelicencijuoti:

    • MPI "Viropack" gamina vaistą "Marcyrl Pharmaceutical Industries" # 8229, vienas iš pirmųjų Egipto generinių vaistų
    • Heterosofiras, išleistas "Pharmed Healthcare". Tai yra vienintelis licencijuotas generinis pavadinimas Egipte. Pakuotėje, po holografine, paslėptas kodas, leidžiantis gamintojo svetainėje patikrinti preparato originalumą, taip pašalinant jo suklastotą
    • "Grateziano", pagamintas Pharco Pharmaceuticals,
    • "Sofolanork", pagamintas Vimeo,
    • Sofocivir, pagaminta ZetaPhar.

    Generics kovai su hepatitu iš Bangladešo

    Bangladešas yra kita šalis, kuri gamina generinius vaistinius preparatus nuo HCV dideliais kiekiais. Be to, ši šalis net nereikalauja licencijų gaminti analogiškų prekinių ženklų narkotikais, nes iki 2030 m. Farmacijos kompanijoms leidžiama išleisti tokius medicinos preparatus be atitinkamų licencijavimo dokumentų. Garsiausios ir naujausios technologijos yra farmacijos kompanija Beacon Pharmaceuticals Ltd. Savo gamybos pajėgumų projektą sukūrė Europos ekspertai ir atitinka tarptautinius standartus. "Beacon" išleidžia šiuos generinius vaistus hepatito C viruso gydymui:

    • Soforal - generinis sofosbuviras, 400 mg veikliosios medžiagos yra. Skirtingai nuo tradicinės pakuotės, kurioje yra 28 buteliukai, Sophoral yra pagamintas iš 8 tablečių lizdinės plokštelės vienoje plokštelėje,
    • Daklaviras yra generinis Daclatasvir, vienoje tabletėje yra 60 mg veikliosios medžiagos. Jis taip pat gaminamas pūslelių pavidalo, bet kiekviename diske yra 10 tablečių,
    • Sofosvel yra generinis Epclusa, kuriame yra 400 mg sofosbuviras ir 100 mg velpatasvir. Pangenotipinis (universalus) vaistas, veiksmingas HCV genotipų 1 ÷ 6 gydymui. Šiuo atveju buteliuose nėra įprastų pakuočių, tabletės supakuotos į 6 lakštus kiekvienoje plokštelėje.
    • Darvoni yra sudėtingas vaistas, kuriame yra 400 mg sofosbuviras ir 60 mg daklatazolio. Jei būtina, kartu su daklatasviru gydykite sofosbuviru, naudodami kitų gamintojų vaistus, turite išgerti kiekvienos rūšies tabletes. Beakonas juos suvienijo vienoje tabletėje. Vienoje plokštelėje Darvoni pakuojamas lizdinėse plokštelėse po 6 tabletes, siunčiamas tik eksportui.

    Perkant preparatus iš "Beacon", remiantis gydymo kursu, reikia atsižvelgti į jų pakuotės originalumą, kad būtų galima įsigyti gydymui reikalingą kiekį. Garsiausios Indijos farmacijos kompanijos Kaip minėta aukščiau, po to, kai šalies farmacijos įmonės gavo licencijas generinių vaistų išleidimui HCV terapijai, Indija tapo pasaulio lyderiu gamyboje. Tačiau tarp visų įmonių daugybės verta paminėti keletą, kurių produktai Rusijoje yra labiausiai žinomi.

    Natco Pharma Ltd.

    Populiariausi farmacijos kompanija yra "Natco Pharma Ltd.", kurios narkotikai išgelbėjo kelių dešimčių tūkstančių žmonių, sergančių lėtiniu hepatitu C, gyvybes. Ji apgynė beveik visą tiesioginio veikimo antivirusinių vaistų, įskaitant sofosbuvirą su daclatasviru ir ledipasviru su velpatasviru, gamybą. "Natco Pharma" pasirodė 1981 m. Haidarabadyje, pradinis 3,3 mln. Rupijų kapitalas, tada darbuotojų skaičius siekė 20 žmonių. Dabar Indijoje 3,5 tūkstančio žmonių dirba penkių "Natco" įmonių, o taip pat yra ir kitų šalių filialai. Be gamybinių padalinių, bendrovė turi gerai įrengtas laboratorijas, kurios leidžia kurti šiuolaikinius medicinos preparatus. Tarp jos pačių pokyčių verta paminėti, kad vaistai kovoja su vėžiu. Vienas iš labiausiai žinomų šios srities vaistų yra Veenatas, pagamintas nuo 2003 m. Ir naudojamas leukemijai. Taip, ir generinių vaistų išleidimas hepatito C viruso gydymui yra "Natco" prioritetas.

    Hetero Drugs Ltd.

    Ši bendrovė nustatė savo tikslą gaminti generinius vaistus, subordinuodama šį siekį į savo pramonės šakų tinklą, įskaitant gamyklas, turinčias filialus ir biurus su laboratorijomis. "Hetero" gamybinis tinklas yra sustiprintas vaistų gamybai pagal bendrovės išduotas licencijas. Viena iš jos veiklos rūšių yra medicinos preparatai, leidžiantys kovoti su sunkiomis virusinėmis ligomis, dėl kurių gydymas daugeliui pacientų tapo neįmanomas dėl didelės pradinių vaistų kainos. Įgyta licencija leidžia "Hetero" nedelsiant pradėti generinių vaistų išleidimą, kurie vėliau pacientams parduodami už prieinamą kainą. Hetero narkotikų sukūrimas prasidėjo 1993 m. Per pastaruosius 24 metus Indijoje pasirodė keliolika gamyklų ir kelių dešimčių gamybos padalinių. Savo laboratorijų buvimas leidžia bendrovei atlikti eksperimentinį medžiagų sintezės darbą, kuris prisidėjo prie gamybos bazės plėtojimo ir aktyvios narkotikų eksporto į užsienio šalis.

    Zydus heptiza

    "Zydus" yra Indijos bendrovė, kurios tikslas - sukurti sveiką visuomenę, kuri, pasak jos savininkų, pasikeis į geresnį žmonių gyvenimo kokybę. Tikslas yra kilnus, todėl siekdamas šio tikslo bendrovė vykdo aktyvią edukacinę veiklą, veikiančią neturtingiausius gyventojų segmentus. Ketvirta, įtraukiant laisvą gyventojų skiepijimą nuo hepatito B. Zidės, atsižvelgiant į gamybos apimtis Indijos farmacijos rinkoje. Be to, 16 vaistų buvo įtraukta į 300 svarbiausių Indijos farmacijos pramonės vaistų sąrašą. "Zydus" produktai yra paklausūs ne tik vidaus rinkoje, bet ir 43-iose mūsų planetos vaistinėse. Ir 7 įmonių pagaminto vaistų diapazonas viršija 850 vaistų. Viena iš galingiausių pramonės šakų yra Gudžarato valstija ir yra viena iš didžiausių ne tik Indijoje, bet ir Azijoje.

    HCV Therapy 2017

    Kiekvieno paciento hepatito C gydymo schemas gydytojas pasirenka atskirai. Norint teisingai, veiksmingai ir saugiai pasirinkti schemą, gydytojas turi žinoti:

    • viruso genotipas
    • ligos trukmė,
    • kepenų pažeidimo laipsnis,
    • cirozės buvimas / nebuvimas, kartu vartojama infekcija (pvz., ŽIV ar kitoks hepatitas), neigiama ankstesnio gydymo patirtis.

    Gavęs šiuos duomenis po analizės ciklo, gydytojas pasirenka optimalią gydymo parinktį, remdamasis EASL rekomendacijomis. EASL rekomendacijos koreguojamos iš metų į metus, jos papildo naujai atsiradusius vaistus. Prieš rekomenduojant naujus gydymo variantus, jie pateikiami Kongresui ar specialiam susirinkimui svarstyti. 2017 m. EASL specialusis posėdis aptarė Paryžiaus rekomenduojamų sistemų atnaujinimus. Buvo nuspręsta visiškai nutraukti gydymą interferonu Europoje HCV gydymui. Be to, nebuvo vieno rekomenduojamo gydymo vieno tiesioginio veikimo vaisto. Štai keletas rekomenduojamų gydymo galimybių. Visi jie skirti tik susipažinti ir negali tapti veiksmų vadovu, nes tik gydytojas gali išrašyti gydymo receptą, kurio priežiūra vėliau bus atlikta.

    1. Galimi gydymo būdai, kuriuos EASL siūlo hepatito C monoinfekcijai ar kartu infekcijai ŽIV + HCV pacientams, kurie neturi cirozės ir anksčiau negydyti:
    • genotipų 1a ir 1b gydymui galite naudoti:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, be ribavirino, trukmė 29 savaites, # 8229, sofosbuviras + daklatasviras, taip pat be ribavirino, 29 savaičių gydymo laikotarpis, # 8229 arba sofosbuvir + velpatasvir be ribavirino, kurso trukmė yra 29 savaites.

    • gydant genotipą 2 vartojamas be ribavirino 29 savaites:

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir, # 8229, arba sofosbuvir + velpatasvir.

    • gydant 3 genotipą be ribavirino vartojimo, gydymo laikotarpiu 29 savaites vartokite:

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, arba sofosbuvir + velpatasvir.

    • 4 genotipo gydymo metu ribotvirus galima vartoti 29 savaičių be ribavirino:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, arba sofosbuvir + velpatasvir.

    1. Rekomenduojami EASL gydymo režimai hepatito C monoinfekcijai ar kartu ŽIV / HCV infekcijai pacientams, kuriems yra kompensuota cirozė ir kurie anksčiau nebuvo gydyti:
    • genotipų 1a ir 1b gydymui galite naudoti:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir su ribavirinu, trukmė 29 savaites, # 8229 arba 24 savaites be ribavirino, # 8229 ir kita galimybė - 24 savaitės su ribavirinu, kai nepalanki reakcijos prognozė, # 8229, sofosbuviras + daklatasviras, jei be ribavirino, tada 24 savaičių ir ribavirino gydymo laikotarpis yra 29 savaites, # 8229 arba sofosbuvir + velpatasvir be ribavirino, 29 savaites.

    # 8229, sofosbuviras + dklatasviras be ribavirino trunka 29 savaites, o ribavirinas - su nepalankia prognoze - 24 savaites, # 8229, arba sofosbuviras + velpatasvir be derinio su ribavirinu 29 savaites.

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir 24 savaičių su ribavirinu, # 8229 arba sofosbuvir + velpatasvir vėl su ribavirinu, gydymo laikotarpis yra 29 savaites, # 8229, sofosbuvir + velpatasvir galima 24 savaičių laikotarpiu, bet be ribavirino.

    • 4 genotipo gydymui naudojami tie patys gydymo būdai kaip ir genotipų 1a ir 1b.

    Kaip matote, be paciento būklės ir jo kūno savybių, gydytojo pasirinktų vaistų derinys taip pat turi įtakos gydymo rezultatams. Be to, gydymo trukmė priklauso nuo gydytojo pasirinkto derinio.

    Gydymas šiuolaikiniais HCV vaistais

    Imkitės vaistų tablečių tiesioginio antivirusinio poveikio, kurį gydytojas nustato žodžiu vieną kartą per parą. Jie nėra dalijami į dalis, nekramtyti, o plauti vandeniu. Tai geriausia tai padaryti tuo pačiu metu, nes palaikoma nuolatinė veikliųjų medžiagų koncentracija organizme. Nebūtina pritvirtinti prie maitinimo datų, svarbiausia tai padaryti ne tuščiu skrandžiu. Kai pradėsite vartoti vaistus, atkreipkite dėmesį į savo gerovę, nes per šį laikotarpį lengviausiai pastebėsite galimą šalutinį poveikį. Savo PPPP jų nėra daug, o komplekse numatyti vaistai yra daug mažesni. Dažniausiai šalutinis poveikis atsiranda:

    • galvos skausmas
    • vėmimas ir galvos svaigimas,
    • bendras silpnumas
    • apetito praradimas
    • sąnarių skausmas,
    • kraujo biocheminių parametrų pokyčiai, išreikšti mažu hemoglobino kiekiu, trombocitų ir limfocitų sumažėjimas.

    Šalutinis poveikis yra galimas nedaugeliui pacientų. Vis dėlto apie visus pastebėtus negalavimus turėtų būti pranešta gydytojui, kuris ėmėsi būtinų priemonių. Siekiant išvengti padidėjusio šalutinio poveikio, alkoholis ir nikotinas neturėtų būti vartojami, nes jie neigiamai veikia kepenis.

    Kontraindikacijos

    Kai kuriais atvejais DAA priėmimas yra atmetamas, tai yra:

    • pacientų padidėjęs jautrumas tam tikroms vaistų sudedamosioms dalims,
    • jaunesni kaip 18 metų pacientai, nes nėra tikslių duomenų apie jų poveikį organizmui,
    • moterys neša vaisius ir žindo kūdikius,
    • moterys turi naudoti patikimus kontracepcijos metodus, kad gydymo metu išvengtų koncepcijos. Be to, šis reikalavimas taip pat taikomas moterims, kurių partneriai taip pat gauna DAA terapiją.

    Laikykite priešvirusinius vaistus tiesioginiams veiksmams nepasiekiamoms vaikams ir tiesioginių saulės spindulių veikimui. Sandėliavimo temperatūra turi būti nuo 15 ° C iki 30 ° C. Pradėdami vartoti vaistus, patikrinkite jų gaminimo ir laikymo datas, nurodytas ant pakuotės. Uždraudžiami vaistai yra draudžiami. Kaip gauti DAA Rusijos piliečiams Deja, indų generinių vaistų negalima rasti rusų vaistinėse. Farmacinė kompanija "Gilead", teikdama licencijas narkotikų išleidimui, protingai uždraudė savo eksportą į daugelį šalių. Įskaitant visas Europos valstybes. Tie, kurie nori įsigyti pigių Indijos generinių vaistų kovojant su hepatitu C, gali pasinaudoti keliais būdais:

    • užsisakykite jas per Rusijos internetines vaistines ir per kelias valandas (ar dienas) gaukite prekes, priklausomai nuo pristatymo vietos. Ir daugeliu atvejų net išankstinio apmokėjimo nereikia
    • užsisakykite juos per Indijos internetines parduotuves, kuriose pristatomas namas. Čia jums reikės išankstinio apmokėjimo užsienio valiuta, o laukimo laikas trunka nuo trijų savaičių iki mėnesio. Be to, pridedamas reikalavimas bendrauti su pardavėju anglų kalba.
    • eik į Indiją ir paimk narkotiką. Taip pat reikės laiko, pridedant kalbos barjerą, taip pat sunku patikrinti vaistinėje įsigytų prekių originalumą. Visa tai bus įtraukta savaiminio išvežimo problema, reikalinga terminė talpykla, prieinama gydytojo nuomonė ir receptas anglų kalba, taip pat čekio kopija.

    Norint įsigyti vaistų, žmonės pats nusprendžia, kuris iš galimų pristatymo variantų pasirinkti. Tiesiog nepamirškite, kad HCV atveju palankus gydymo rezultatas priklauso nuo jo atsiradimo greičio. Čia, tiesiogine prasme, mirties atidėjimas yra panašus, todėl neturėtumėte atidėlioti procedūros pradžios.