Ar į PCR diagnostikos klaidas įmanoma? Neteisingi ir klaidingai teigiami PGR rezultatai

Simptomai

Įvairios aplinkybės gali turėti įtakos klaidingų rezultatų nustatymui PCR diagnostikoje, tiek klaidingai teigiamai, tiek klaidingai neigiamai.

Polimerazės grandininės reakcijos metodo taikymas - PGR - reikalauja griežčiausio visų analizės etapų laikymosi, pradedant nuo gydytojo atliktos analizės rezultatų interpretavimo. Kaip informatyvi PGR analizė priklauso nuo daugelio aplinkybių.

  • Pasikliaujančių klinikinių tyrimų rezultatai gali atsirasti dėl kraujo patekimo į medžiagą (tepinėlis ar šlaplės išsiurbimas).
  • Panaši klaidingai teigiami PGR tyrimo rezultatai gaunami dėl to, kad į medžiagą nepatektų į epitelio ląsteles, bet į didelės apimties visiškai neinformatyvios gleivės turinį.
  • Neteisingas gautų mėginių vežimas ir saugojimas turi įtakos klaidingiems DNR analizei gauti. Tokiu atveju infekcijos DNR gali būti sunaikinta ir dėl to yra klaidingai neigiamas rezultatas.
  • Kita klaidingai teigiamo PGR priežastis yra PGR diagnostikos metu sutrikęs sterilumas. Užsieniečio bakterijos gali patekti į paciento surinktą medžiagą iš gydytojo rankų, iš drabužių, stiklo ar užterštų prietaisų, daugkartinio naudojimo indų. Dėl to bus aptiktos "neegzistuojančios" infekcijos.
  • Reagentų netinkamumas. Neįrengta ir netinkama laboratorija, kurioje gydytojai "uždaro akis" dėl reagentų netinkamumo, yra dar viena rimta klaidingos diagnostikos priežastis. Žinoma, tai labai sumažina laboratorinės diagnostikos išlaidas, bet tai gali ne tik paveikti jo rezultatus.

Siekdama išvengti tokių klaidų, medikų centre "Evromedprestizh" labai rimto požiūrio į laboratorinės diagnostikos elgesio gydytojai: naudoti tik vienkartines medžiagas visais analizės etapus, laikytis būtinų priemonių, skirtų visiškai sterilumo laboratorijoje ir gydytojo kabinete priežiūra. Mes naudojame tik aukščiausios kategorijos gydytojus ir patyrusius technikus, kurie nuolat tobulina savo įgūdžius, kad neišgydytų neegzistuojančių ligų, bet gautų patikimų rezultatų.

Klaidinga teigiama PGR

Mūsų privalumai:

  • Pigūs gydytojo paskyrimas nuo 900 rublių
  • Skubi analizė gydymo dieną nuo 20 minučių iki 1 dienos
  • Už 5 minučių kelio nuo metro stoties "Varshavskaya" ir "Chistye Prudy"
  • Mes dirbame patogiai kiekvieną dieną nuo 9 iki 21 kiekvieną dieną (įskaitant atostogas)
  • Anonimas!

Polimerazės grandininė reakcija yra galbūt vienas iš labiausiai jautrių ir tiksliausių būdų diagnozuoti įvairias infekcines ligas, ypač lytiniu būdu plintančias ligas. Netgi nedidelis kiekis bakterijų, virusų, grybų, PGR dalelių yra gana specifinis metodas, retai pateikiantis klaidingai teigiamus rezultatus.

Klaidingas teigiamas rezultatas reiškia, kad iš tikrųjų nėra infekcijos, o reakcija yra teigiama.

Tačiau net ir 98-99 proc. Tikslumu, PCR kartais taip pat yra klaidingų atsakymų, kurie beveik niekada nebuvo susiję su pačia reakcija, bet daugiau - su pažeidimais preliminariame etape.

Klaidingos teigiamos PGR analizės priežastys:

  • Kontrolinių testų po lytinių organų infekcijų gydymo sąlygos nebuvo įvykdytos. Faktas yra tas, kad dauguma infekcijų yra ląstelių viduje arba fiksuojamos ant jų membranų paviršiaus. Visiško gydymo metu miršta STI sukėlėjas, bet jo genomo (DNR) dalelės tam tikru metu lieka šeimininko kūne. Tai užtruks maždaug 3 savaites, kad šias ląsteles pakeistų naujais, neturinčiais sąlyčio su infekciniu agentu, tada imamasi kontrolės. Jei anksčiau mes atliksime analizę, tada dėl savo didelio jautrumo PCR nustatys jau mirusių bakterijų DNR ir parodys patogeno, kuris bus klaidingai teigiamas, buvimą, nes infekcija jau mirė.
    Mūsų gydytojai turi pakankamai žinių apie STD diagnozavimą ir terminų laikymąsi, todėl tokios situacijos klinikoje nėra privačios praktikos.
  • Lytiniu keliu plintančių infekcijų DNR infekcija mėgintuvėlyje iš venerologo rankų, su pirštinėmis ir urologiniais zondais.
    Šis faktorius neįtraukiamas, nes medžiagos surinkimui naudojamos tik vienkartinės pirštinės, mėgintuvėliai ir zondai.
  • Klaidingi teigiami rezultatai yra labai retai, kai yra glaudžiai susiję mikroorganizmai. Tai reiškia, kad analizatorius atskleidžia patogeniškos bakterijos, kuri sukelia venerinę ligą, buvimą, bet iš tikrųjų tai yra įprastos mikrofloros sudedamoji dalis. Tačiau ši problema jau seniai išspręsta diegiant modernesnes ir specifines bandymų sistemas.
  • Laboratoriniame tyrimo etape taip pat buvo įmanoma užteršti ar infekuoti DNR infekciją mėgintuvėlyje, tačiau praktiškai neįmanoma tinkamai organizuoti diagnostikos procesą ir personalo mokymą.

Bet kuriuo atveju diagnozė visada atliekama ne tik remiantis vienos analizės rezultatais. Galutinė lytiniu keliu plintančių ligų diagnozė yra skundų, klinikinių tyrimų ir įvairių laboratorinių ir instrumentinių metodų derinys.

Jei urologas, ginekologas ar venerologas abejoja dėl gautų PGR rezultatų teisingumo arba tarp esamos klinikinės nuotraukos ir laboratorinių diagnostikos duomenų yra neatitikimų, gydytojas visada rekomenduos papildomus tyrimus ELISA, NASBA metodais, kad išsiaiškintų situaciją.

Mūsų klinikose yra visi šiuolaikinėje medicinoje prieinami vyrai ir moterys. Todėl neįmanoma nustatyti klaidingų LPI diagnozių nustatymo.

Gydytojas klinikos "Privati ​​praktika" dermatovenerologė, urologas Volokovas EA pasakoja apie PGR tyrimą dėl infekcijos.

Medicinos centras "Chistye Prudy" ir "Varshavka"

Priėmimas mūsų klinikose kasdien nuo 9 iki 21 val

Pietinėje administracinėje apskrityje ir Pietvakarių administraciniame apskrityje - metro Varšuva, Kahovskaja, Sevastopolskaya - ul. Bolotnikovskos pastatas, 5 aukštas, 2, tel. 8-499-317-29-72

Centre (CAO) - Metro Chistye Prudy, Turgenevskaya, Lubianka - Krivokolenny ežero namas 10, pastatas 9, tel. 8-495-980-13-16

Klausimai

Klausimas: ar tiksliai yra PGR diagnozė?

Koks yra PGR diagnostikos tikslumas?


PCR (polimerazės grandininės reakcijos) diagnostika tam tikrų infekcijų tikslumu svyruoja nuo 99 iki 100 procentų.
PGR labai retai pateikia klaidingai neigiamų rezultatų ir praktiškai neužtikrina klaidingai teigiamų rezultatų. Neteisingas rezultatas yra tada, kai analizė rodo, kad nėra patogeniško mikroorganizmo (infekcijos šaltinio), kai iš tiesų jis egzistuoja.
Tai gali atsitikti tais atvejais, kai:

  • Neteisingai parinkta biologinė medžiaga. Pavyzdžiui, kai citomegalovirusinė infekcija tiriamas šlapimas (ne gerklės tamponu arba kraujo), arba užkrėtimo CNS (centrinės nervų sistemos) diagnozės, o ne su smegenų skysčio kraujyje.
  • Nebuvo laikomasi biologinių medžiagų surinkimo taisyklių. Jei asmuo, atliekant PGR testus, patyrė antibiotikų terapijos kursą, jis vartojo urozeptikus ir antivirusinius vaistus. Panašiai, klaidingai neigiami tyrimai gali pasireikšti, jei pacientas šlapinasi, turėjo lytinių santykių prieš vieną dieną arba vartojo vaistinius preparatus kaip makšties žvakidę (žvakidė) prieš pradedant tepimą ar šlapimą.
  • Ištyrus infekcijos šaltinį, kuris jo gyvybinės veiklos metu gali keistis. Kiekvieno mikroorganizmo šerdis yra gebėjimas keistis. Kai kurie virusai gali įsigyti DNR lygį (dezoksiribonukleino rūgštį) kintamumą. Pavyzdžiui, gripo virusas turi puikią galimybę "mutacijos" ir keisti savo genetinę informaciją. Taigi, PCR gali neatskleisti infekcijos šaltinio, nes genomas (genų rinkinys) gali keistis.

Klaidingas teigiamas rezultatas (analizė rodo infekcijos buvimą, kai to nėra) nėra būdinga PGR diagnostikai ir yra tik tais atvejais, kai infekcija jau yra "mirusi", tačiau jos negyvos ląstelės kinta cirkuliuoja. Negalima išskirti "mirusio" infekcijos iš aktyvios (gyvos) infekcijos yra viena iš PGR metodo trūkumų. Jei asmuo jau turi tam tikrą infekciją (liga buvo gydoma ir nužudyta antibakteriniais ar antivirusiniais vaistais), PCR analizė vis dar duos teigiamą rezultatą patogenui, net jei jis jau yra "miręs".

Kai gali būti klaidingai teigiamas sifilio testas

Sifilio apibrėžimo analizė, kurią asmuo turi priimti beveik visus: įdarbinimas, medicinos komisijos, prevenciniai egzaminai, nėštumas. Šių tyrimų įgyvendinimas yra būtinas - jie leidžia jums nustatyti ligą ankstyvosiose stadijose, kai gydymas bus didžiausias.

Žmones dažnai nustebina teigiamą rezultatą, ypač nesant jokios priežasties. Klaidingo teigiamo sifilio nustatymas yra gana dažnas įvykis, todėl nebūtina paniką prieš laiką. Remiantis skirtingų šaltinių informacija, iki 30% pradinių tyrimų gali būti klaidingas rezultatas. Šis reiškinys yra daug priežasčių: kūno būklės pokyčiai, somatinės ligos. Norint geriau suprasti, kodėl jie atsiranda, verta išsamiau suprasti studijų problemą.

Sifilio testų tipai

Klinikiniai tyrimo metodai kasmet gerėja. Kuriant naujus diagnozavimo metodus, klaidingi teigiami rezultatai dėl sifilio tampa vis mažiau. Jei reikia, diagnozė gali apimti kelis skirtingus metodus - tai leidžia jums gauti patikimiausią rezultatą.

Nepagrindiniai tyrimo metodai

Šie metodai skirti identifikuoti baltymus, kurie susidaro dėl šviesios spirocheto veiklos. Jie skirti nustatyti ligos "pėdsakus". Tokie metodai turi palyginti didelį klaidų procentą (iki 10%). Tokie metodai yra nespecifiniai, tačiau leidžia nustatyti antikūnų titrą nustatyti infekcijos laipsnį.

Wasserman RW reakcija

Dažniausiai atliekama balto treponemos nustatymo analizė yra serologinis kraujo tyrimas. "Wassermano" reakcija leidžia nustatyti ligos buvimą tik kelias minutes. Todėl šis metodas labiausiai naudojamas laboratorijose - jam nereikia daug laiko ir yra santykinai mažos kainos.

Atliekant analizę naudojamas nugaros smegenų skystis arba kraujas. Tyrinėtos medžiagos mėginiai gali būti imami iš piršto (jei analizė yra tik viena) arba iš venų (jei reikalingi keli tyrimai). Analizės rezultatas gali būti ne tik klaidingai teigiamas, bet ir klaidingas neigiamas. Tai įmanoma tokiomis aplinkybėmis:

  • ankstyva infekcijos stadija, kai treponemo kiekis organizme vis dar yra mažas;
  • lėtinė liga remisijos stadijoje, kai sumažėja antikūnų skaičius.

Atkreipkite dėmesį! Klaidingas ir neigiamas rezultatas atsiranda labai retai, taigi, jei yra bent vienas pliusas iš keturių, reikia atlikti papildomą tyrimą.

Gavėjo mikroreakcija (MR)

Šis tyrimo metodas pagrįstas antigenų antikūnų reakcija. Tam reikia nedidelės medžiagos kiekio. Juo siekiama nustatyti antilipidinius antikūnus, kurie susidaro treponemos ląstelių sunaikinimo procese. Tyrimas naudojamas kaip paciento kraujas ir galvos smegenų skystis.

Kadangi ląstelių sunaikinimas gali pasireikšti ne tik sifiliu, analizė naudojama kaip kvalifikacinė, o ne patvirtinanti. Yra du analogai šios technikos:

  • Mikroskopinis testas (VDRL). Analizuojamas inaktyvuotas serumas. Jei nervų sistema yra pažeista sifiliu, bandomosios medžiagos naudojamas cerebrospinalinis skystis.
  • Makroskopinis bandymas (RPR). Tai laikoma greito diagnozavimo metodu. Vizualiai apskaičiuojamas plazmos reaginas.

Pateikta reakcija, kai nesilaikoma būtino sterilumo, gali parodyti klaidingą teigiamą rezultatą. Tokios analizės išvaizda taip pat įmanoma dėl nespecifinio audinio pažeidimo, kuris reiškia lipidų sunaikinimą. Jei yra teigiamas rezultatas, rekomenduojama atlikti treponeminį testą, kad patvirtintumėte.

Treponeminiai tyrimo metodai

Ši analizės kategorija suteikia tiksliausius duomenis ir retai pasitaiko klaidingai teigiamų rezultatų. Moksliniai tyrimai yra skirti nustatyti konkrečius baltymus, kuriuos organizmas išskiria reaguodamas į infekciją. Šios technologijos turi didesnę kainą, todėl jos naudojamos kaip patvirtinančios, bet netinkamos.

Konkrečius antikūnus organizmas pradeda gaminti tik kelias savaites po treponemos infekcijos. Jie gali išlikti ilgą laiką gydyti ligą. Todėl specialūs tyrimai ilgą laiką po remisijos gali parodyti teigiamų rezultatų.

Atkreipkite dėmesį! Kai teigiamas RW ir neigiamas specifinis, per keletą savaičių peržiūrimas.

ELISA (ELISA, PAV)

Remiantis IgA, IgB ir IgM klasės imunoglobulinų lygiu. Pirmieji du baltymų tipai gaminami organizme jau nuo 2 savaičių infekcijos, o IgM - praėjus mėnesiui po infekcijos.

Analizės aiškinimas grindžiamas imunoglobulinų buvimo santykiu:

  • nustatytas tik IgA - nuo infekcijos praėjo ne daugiau kaip 14 dienų;
  • IgA ir IgB buvo aptiktos - infekcija pasireiškė prieš 14- 28 dienas;
  • nustatė visus tris tipus - sifilį organizme ilgiau nei 28 dienas;
  • aptiktas tik IgM - vėlyvas sifilis.

IgM buvimas gali būti jau išgydyto sifilio ženklas - IgM imunoglobulinų sintezė gali tęstis keletą mėnesių po remisijos.

Imunofluorescencijos reakcija (LPS)

Naudojamas infekcijai patvirtinti kuo anksčiau. Tyrimui kraujas paimamas iš piršto ar venų. Rezultatas yra panašus į RW analizę, kurioje nurodomas minusas arba nuo 1 iki 4 pliusų. Jei yra bent vienas pliusas, galima atlikti papildomus tyrimus.

Įrodantys kliniškai teigiami rezultatai yra labai retai atliekant RIF - jie gali būti nėščioms moterims, taip pat pacientams, sergantiems jungiamojo audinio ligomis.

Pasyvios agliutinacijos reakcija (RPHA, TPHA)

Antikūnų titras leidžia nustatyti sifilio buvimą ir jo pakopą. Patikimi duomenys, kuriuos šis metodas duoda praėjus 28 dienoms nuo infekcijos. Vertinimui naudojamas kraujas iš piršto ar venų. Padidėjęs antikūnų kiekis reiškia vėlesnę ligos stadiją.

Tiksliausi tyrimo metodai

Šios grupės analizės yra labai jautrios, todėl jų rezultatų klaida yra labai maža. Joms skiriamos didesnės išlaidos, palyginti su kitais metodais, ir sudėtingesnė vykdymo technika.

Polimerazės grandininė reakcija (PGR)

PGR analizė laikoma viena iš tiksliausių. Juo siekiama identifikuoti patogenų DNR vietas žmogaus organizme. Šis metodas reikalauja specializuotos įrangos ir reagentų, todėl retai naudojamas.

Imunoblotingas

Kombinuotas tyrimo metodas. Reaguojama į imunoglobulinų nustatymą paciento serume. Analizė patvirtina antikūnų komplekso buvimą, pagal kurį nustatyta diagnozė. Šiuo metodu naudojamas elektroforezė, kurios pagalba atskiriami imunodeterminantai, ir ELISA reakcija, kurioje yra atskiri punktai.

Balto treponemos (RIBT) imobilizavimo reakcija

Labai specifinė analizė, kuri nustato serumo reakciją į baltą treponemą. Jis yra plačiai naudojamas visame pasaulyje, nes jis turi didelę tikimybę gauti tikslią rezultatą. Specialūs antikūnai (imunomobilizinas) sifilio turinčiam pacientui gali uždrausti treponemą. Šio antikūnų sveiko žmogaus kraujyje nėra. Tai priklauso nuo šio gebėjimo buvimo / nebuvimo ir pagrįsta tyrimų metodika.

RIBT naudojamas sifilio veislėms identifikuoti, kai Wassermano reakcija sukelia neigiamus rezultatus - žala nervų sistemai, vidaus organams, paslėptos ligos formos. Labai retas klaidingas teigiamas rezultatas NVS šalyse. Jo atsiradimo priežastis gali būti sarkoidozė, raupsai.

Klaidingai teigiamų rezultatų priežastys

Wassermano reakcija gali apibrėžti "ūmius" ir "lėtinius" klaidingus teigiamus rezultatus. Jo sunkumas priklauso nuo žmogaus būklės pokyčių pobūdžio. Parodykite paūmėjimo etapą RW tokiais atvejais:

  • infekcinės ligos ūminėje stadijoje;
  • trauminiai sužalojimai;
  • miokardo infarktas;
  • bet kokios vakcinos įvedimas likus kelioms dienoms iki tyrimo;
  • apsinuodijimas maistu.

Šios sąlygos būdingos stiprėjusi imuninės sistemos funkcija, dėl kurios padidėja antikūnų gamyba. Reakcijoje jie klaidingai pripažįstami antikūniais prieš treponemą, todėl atsiranda teigiamas rezultatas.

Esant lėtinio pobūdžio patologijoms, imuninė sistema gamina daugybę nespecifinių antikūnų, galinčių sukelti reakciją. Į RW ši valstybė gali parodyti klaidingą teigiamą rezultatą. Todėl verta įspėti gydytoją apie šias ligas:

  • lėtinės jungiamojo audinio patologijos;
  • tuberkuliozė;
  • lėtinės ligos, susijusios su virusine etiologija: ŽIV, hepatitas B, C, D;
  • lėtinė kepenų liga;
  • autoimuninė patologija.

Su amžiumi paciento kūne redukcinės reakcijos sulėtėja. Audinių senėjimas taip pat gali parodyti klaidingą teigiamą rezultatą, todėl vyresnio amžiaus pacientams reikalingi tikslesni tyrimo metodai.

Atkreipkite dėmesį! Teigiamo Wassermano reakcijos atveju atliekami papildomi tyrimai, leidžiantys gauti tikslesnį vaizdą.

Pakartotinai patikrinti

Pakartotinis testas dėl sifilio yra atliekamas su abejotinais atrankos tyrimų rezultatais. Jis yra skiriamas dalyvaujant vienam ar dviem kryžiams - ši analizė reikalauja papildomo patikrinimo. Tyrimas gali kelti klaidingus teigiamus rezultatus keliais atvejais:

  • Ankstyvas ligos etapas. Prieš pasirodant kietajam šokui, imunoglobulinų kiekis organizme yra gana mažas.
  • Vėlyvoji liga. Nuo infekcijos praėjo daugiau kaip 2 metai, o antikūnų titras palaipsniui pradėjo mažėti.

Kartotinė analizė, atliekama per 2-3 savaites, tiksliai parodo, ar yra ligos. Jei antrą kartą yra teigiamų rezultatų, naudojami papildomi paaiškinimo metodai.

Nėštumo testai

Vienas iš labiausiai netikėtų priežasčių gali būti teigiamas sifilio tyrimas nėščioms moterims, ypač jei moteris nepakeitė partnerio. Tokia situacija dažnai nuliūdo būsimas motinas, nes treponema gali neigiamai paveikti gimdos kūdikio vystymąsi.

Nėštumo metu atliekamas atrankinis tyrimas atliekamas keletą kartų:

  • registruojant 12 savaičių;
  • pradėti 3 trimestrus, po 30 savaičių;
  • prieš gimdymą.

Tai yra minimali mokslinių tyrimų dalis. Klaidingas teigiamas sifilio testas gali atsirasti dėl kūno restruktūrizavimo, kuris vyksta nėštumo metu. Kai moteriai tenka vaikas, imuninė sistema gamina daug antikūnų - tai yra evoliucinis prietaisas, apsaugantis kūdikį pirmaisiais gyvenimo metais.

Nėštumo metu nustatykite papildomą aiškinamąją analizę, kuri pasižymi didesniu tikslumu. Jei kontrolinis tyrimas rodo, kad organizme yra patogeno, reikia gydyti. Gydymo poveikis augančiam organizmui yra žymiai mažesnis už galimą treponemos pakenkimą.

Kaip pasirengti analizei?

Vienas iš būdų užkirsti kelią neteisingam rezultatui - pasirengti testavimui. Dėl netinkamo paruošimo gali atsirasti reakcijų, kuriomis lydi nespecifinių antikūnų gamyba, dėl kurių atsiranda netinkamas rezultatas.

  • Analizė turi būti atliekama tuščiu skrandžiu. Galite naudoti tik švarų vandenį.
  • Per dieną prieš kraujo mėginių ėmimą būtina visiškai pašalinti alkoholį - tai sukuria papildomą kraujo kepenų kiekį, dėl kurio gali atsirasti teigiamas rezultatas.
  • Išvakarėse rekomenduojama atsisakyti riebių ir keptų maisto produktų, aštrų patiekalų ir daugybę prieskonių.
  • Mažiausiai 60 minučių iki analizės rekomenduojama susilaikyti nuo rūkymo.
  • Prieš kraujo priėmimą iš venų, reikia atidėti 10-15 minučių greitosios pagalbos kambaryje.
  • Moterims nerekomenduojama kraujo paaukoti per menstruacijas.
  • Neįmanoma atlikti analizės po radiologinio tyrimo, fizioterapinių procedūrų.
  • Infekcinių ligų paūmėjimo laikotarpiu draudžiama kraujo donorystė sifiliui.

Atkreipkite dėmesį! Jei pacientas vartoja bet kokius vaistus, prieš pradėdamas tyrimą jis turėtų pasikonsultuoti su gydytoju, gali prireikti prailginti keletą dienų nuo vaistų vartojimo ir analizės.

Ką daryti, kai patvirtina sifilį?

Nesijaudinkite, kai gaunate pirminę atranką su teigiamais rezultatais. Suklastotas sifilis yra lengvai nustatomas atliekant pakartotinius tyrimus. Tačiau, jei diagnozė buvo patvirtinta, turite imtis veiksmų:

  • seksualinio partnerio su dermatovenerologu tyrimas;
  • artimų giminaičių tyrimas;
  • profilaktinio gydymo, skirto užkirsti kelią infekcijai giminaičiuose, įgyvendinimas;
  • ligonių sąrašo registravimas gydymo laikotarpiu - sergančiųjų sąraše nėra informacijos apie diagnozę, užtikrinančią konfidencialumą;
  • Pasibaigus gydymo kursui, išduotas specialus pažymėjimas - jums reikia jį su savimi, kad per ateinančius kelis mėnesius būtų išvengta klaidingų teigiamų rezultatų.

Teigiamas sifilio rezultatas ne visada yra patikimas. Todėl nesijaudinkite ir rekomenduojama laukti papildomų tyrimų. Tinkamas gydymo būdas, kuris buvo pradėtas laiku, garantuoja greitą atsistatymą su mažiausiu likusiu poveikiu.

Ar į PCR diagnostikos klaidas įmanoma? Neteisingi ir klaidingai teigiami PGR rezultatai

Pasidalykite nauja informacija:

Įvairios aplinkybės gali turėti įtakos klaidingų rezultatų nustatymui PCR diagnostikoje, tiek klaidingai teigiamai, tiek klaidingai neigiamai.

Polimerazės grandininės reakcijos PCR metodu reikia griežtai laikytis visų analizės stadijų, pradedant nuo analitiko atrankos, kad būtų galima aiškinti analizės rezultatus. Kaip informatyvi PGR analizė priklauso nuo daugelio aplinkybių.

  • Pasikliaujančių klinikinių tyrimų rezultatai gali atsirasti dėl kraujo patekimo į medžiagą (tepinėlis ar šlaplės išsiurbimas).
  • Panaši klaidingai teigiami PGR tyrimo rezultatai gaunami dėl to, kad į medžiagą nepatektų į epitelio ląsteles, bet į didelės apimties visiškai neinformatyvios gleivės turinį.
  • Neteisingas gautų mėginių vežimas ir saugojimas turi įtakos klaidingiems DNR analizei gauti. Tokiu atveju infekcijos DNR gali būti sunaikinta ir dėl to yra klaidingai neigiamas rezultatas.
  • Kita klaidingai teigiamo PGR priežastis yra PGR diagnostikos metu sutrikęs sterilumas. Užsieniečio bakterijos gali patekti į paciento surinktą medžiagą iš gydytojo rankų, iš drabužių, stiklo ar užterštų prietaisų, daugkartinio naudojimo indų. Dėl to bus aptiktos "neegzistuojančios" infekcijos.
  • Reagentų netinkamumas. Neįrengta ir netinkama laboratorija, kurioje gydytojai "uždaro akis" dėl reagentų netinkamumo, yra dar viena rimta klaidingos diagnostikos priežastis. Žinoma, tai labai sumažina laboratorinės diagnostikos išlaidas, bet tai gali ne tik paveikti jo rezultatus.

Pasidalykite nauja informacija su draugais ir pažįstamais:

Kas yra geresnė ir veiksmingesnė laboratorinėje diagnostikoje - PGR arba ELISA analizė?

PGR ir ELISA yra du diagnostiniai metodai, kuriuos pripažino medicinos specialistai. Abu tyrimai iš molekulinės biochemijos kategorijos - tikslūs ir patikimi. Yra skirtumas tarp PGR ir ELISA, kuris geriau ir teisingai charakterizuoja patologiją? Norint atsakyti į klausimą, būtina suprasti technikos esmę, nustatyti diagnostinių metodų panašumus ir skirtumus.

Kas yra PGR?

PGR yra labai jautri polimerazės grandininė reakcija, kuri aptiks ligos sukėlėją (virusus, bakterijas, chlamidijas) organizme. Ši technika pagrįsta konkrečios DNR struktūros nustatymu infekcijoje. PGR atliekama, jei įtariama latentinė lėtinė infekcija organizme, kuri yra latentinės formos. PGR ypatybės ir privalumai:

  • didelis 100% jautrumas bet kokio tipo sukėlėjams, turintiems unikalių nukleino rūgšties fragmentų;
  • rezultato gavimo greitis;
  • gebėjimas nustatyti vieno tipo patogeno skaičių;
  • kartu diagnozuojama keletas ligų sukėlėjų.

Laboratoriniai padėjėjai gali lengvai nustatyti vieno patogeno, naudojant polimerazės grandininę reakciją, struktūrą, kuri leidžia stebėti ir vertinti gydymo rezultatus po gydymo vaistais. PGR, kaip naujas tyrimo metodas, yra būtinas tokioms ligoms diagnozuoti:

  • tuberkuliozė;
  • difterija;
  • salmoneliozė;
  • ŽIV;
  • AIDS;
  • hepatito C nepriklausomas etapas;
  • bakteriozė.

Kas yra ELISA?

ELISA yra imuninis tyrimo metodas ir tiksli analizė, leidžianti identifikuoti infekcinių patogenų sukeltas patologijas. Tyrimas numatytas įtarus:

  • sifilis;
  • hepatitas B, C;
  • chlamidija;
  • toksoplazmozė;
  • citomegalovirusas;
  • herpes virusas;
  • ureaplazmozė;
  • moterų mikoplazmozė.

Imunofer gali anksti nustatyti onkologiją. ELISA yra skiriamas nustatyti hormonų kiekį kraujyje, diagnozuoti endokrininės sistemos ligas, nustatant naviko žymenis. Imunologinis tyrimas turi daug privalumų:

  • paprastumas ir greitis;
  • didelis jautrumas antigenų antikūnų reakcijose net ir dėl mažos patogenų koncentracijos organizme fone;
  • aukšto lygio analizės specifika, kuri leidžia greitai aptikti ir įdiegti antigenų antikūnų kompleksą, naudojamas fermentas bus naudojamas kaip etiketė, kuri gali tiksliai užfiksuoti jų tarpusavio sąveikos signalą, atpažinti imunoglobulinus (antikūnus igm, igg) kraujyje.

Esant infekcijai kūno pradiniame etape, vyrauja M klasės imunoglobulinai. Kai infekcija progresuoja, prisijungia A klasės antikūnai. Jei liga prasiskverbia į pažengusią stadiją, pradedama gaminti G klasės imunoglobuliną. Imunoglobulino fermento reakcija atskleidžia ligos sunkumą ir patologijos stadiją.

Koks skirtumas tarp ELISA ir PGR?

PGR ir imuninės fermentinės (IFA) analizės yra vienodai reikalingos diagnostikos tikslais. Abi studijos turi privalumus ir trūkumus, panašumus ir skirtumus.

  1. ELISA. Pagrindinė kryptis yra žymenų baltymų atliekų nustatymas arba ryšių tarp patogeno ir imuninės sistemos nustatymas. Atsisakymas ar patvirtinimas apie infekcijos plitimą organuose. ELISA ir PGR skirtumas yra bet kokios biomedžiagos tinkamumas analizei: audinio, seilių, šlapimo ir kraujo mėginys.
  2. PCR leidžia nustatyti konkretų patogeną, priklausantį grybų, virusų, bakterijų grupei. Polimerazės diagnostikos metodas aptiks patogenišką organizmą tirtoje medžiagoje: skysčių, audinių, organų. Norint gauti didelį vaizdą apie patologinius procesus, vykstančius kūno viduje, gydytojai nustato 2 rūšių analizę vienu metu komplekse. Tai svarbu nustatant STD (lytiniu santykiu perduodamas patologijas).

Siekiant tiksliai nustatyti lytiniu keliu plintančią infekcinę ligą ir antikūnų kiekį kraujyje, atliekama pirmoji PCR, nes ELISA rezultatai negali būti laikomi tyrimų pagrindu, negaunant pirminių duomenų.

Kai antikūnai organizme nustatomi vienu ELISA metodu, neįmanoma tiksliai pasakyti: ar organizmo patologinis procesas vyksta ar ne. Gali būti sąlytis su patogene, tačiau anksčiau, ir analizė gali sukelti klaidingą rezultatą.

Jūs negalite padaryti vienareikšmių išvadų dėl PGR arba ELISA, ir tai iš tikrųjų yra labiau patikimas. ELISA yra veiksmingas diagnostinis metodas, tačiau tik PCR gali patvirtinti ligos sukėlimo tikimybę, todėl tikslinga abiejus tyrimus atlikti kartu. PGR yra tikslesnis bandymo metodas, bet audinio medžiagos pavyzdyje ir atskiroje kūno dalyje. Nepaisant šio metodo tikslumo, dažnai pasitaiko klaidų, nes infekcinis procesas gali greitai išsipleisti visame kūne.

Skirtumas tarp studijų

Sekite pažangą, pavyzdžiui: chlamidijos per gimdos kaklelio kanalą, sunku. Kiaušidėse ir kiaušintakiuose tūryje infekcija gali nebūti, kai ELISA tyrimas teigiamai atsako, o PGR testas - neigiamas. Taip atsitinka, kad priešingai. 100% rezultatui geriausiai atlikti kartu PCR ir ELISA tyrimai.

Taip atsitinka, kad PGR arba ELISA rezultatai nesutampa, tai atsitinka su ilga chroniška infekcija ar kūno priklausomybe nuo jo įtakos. Šiuo atveju ELISA yra neigiama, o PGR yra teigiamas. Jei tepiniuose yra kai kurių mikrobų, tačiau susidarę antikūnai ir titrai ilgaamžė kraujyje išsaugoti net po gydymo, ELISA bus teigiamas ir PGR bus neigiamas.

Dažnai metodai duoda klaidingai teigiamus netikslius atsakymus, kai, pavyzdžiui: ELISA yra teigiamas, PGR yra teigiamas. Pacientų simptomams atsižvelgiama į tai, ar jie buvo gydomi nuo infekcijų. Galų gale atsitiks, kad PGR yra neigiamas, o ELISA tyrimas yra neigiamas.

Įvairiems klinikiniams atvejams reikia individualaus požiūrio. Todėl, kokią analizę geriau atlikti ir kas tiksliau: PGR arba ELISA - sprendimą priima gydantis gydytojas.

Turi būti patikrinta, ar nėra paslėptų lytinių organų infekcijų, ir būti tikrinama pageidautina su partneriu. Galų gale taip atsitinka, kad vienas aiškiai rodo uždegiminio proceso eigą, o kitoje net nėra įtarimų, kurie neigiamai veikia lytinį gyvenimą ir sukelia nepasitikėjimą. Visuomet geriau kreiptis į gydytoją ir gydyti abi partneres, kad būtų padidintas gydymo kursų veiksmingumas ir sutrumpintas gydymo laikas.

Pavyzdžiui: ureaplazmozės ir mikoplazmozės metu geri uždegiminių procesų dubens gydymo rezultatai gali būti gauti tik tuo atveju, jei atliekamas jungtinis gydymo kursas.

Atsižvelgiant į ypatumus, galima daryti išvadą, kad PGR tyrimai ir ELISA tyrimai skiriasi, tačiau abu metodai gali patikimai nustatyti patologijų buvimą. Tačiau tik specialistai gali nustatyti skirtumą tarp metodų, pasirinkti realius ir teisingus diagnostikos metodus, tiksliau išnagrinėti analizės rezultatus.

Daugiau apie PCR metodą galite sužinoti iš vaizdo įrašo:

Tipiškos polimerazės grandininės reakcijos diagnozės paklaidos

Laboratorinė diagnostika dėl polimerazės grandininės reakcijos (PGR), dėl jos greito ir didelio jautrumo, vis labiau plinta. Tačiau, nepaisant metodo paprastumo ir patogumo, yra keletas sąlygų, kurių nesėkmė gali sukelti nepatikimą ar klaidingą rezultatą.

Paprastai iš pirmo žvilgsnio šis metodas turi keletą "spąstų", kurias vienas ar keli metodai turi spręsti beveik kiekvienas laboratorijos specialistas. Trūkstant šios technikos naudojimo patirties, taip pat darbuotojų, kurie anksčiau dirbo biocheminėse ar bakteriologinėse laboratorijose ir kuriuose yra kitų darbo reikalavimų, mąstymo stereotipai gali sukelti įvairias klaidas. Dėl tokių klaidų gali būti gaunami klaidingai teigiami, klaidingai neigiami arba nepatikimi testavimo rezultatai.

Visos laboratorijos praktikoje padarytos klaidos gali būti suskirstytos į tris klases:

  • preanalitinės fazės klaidos;
  • analizės etapo klaidos;
  • po analizės etapo klaidos.

PGR diagnostikos prieš analizės etapą klaida

Biologinės medžiagos paėmimas.

Chlamydia trachomatis gali paveikti urogenitalinio trakto gleivinės epitelią, akies konjunktyvą ir sinovinę ertmę. Todėl, jei įtariama urogenitalinė chlamidiozė, tyrimo medžiaga turėtų būti iš urogenitalinio trakto išbrėžimų, o akies pažeidimas naujagimyje - iš akies konjunktyvo išbrinkimas, chlamidinis artritas - sinovijų skysčio punkcija.

Mycobactrium tuberculosis gali paveikti beveik bet kokį žmogaus kūno organą ir audinį, t. Y. Medžiaga, kuria tyrimas neturėtų būti vienodas skirtingoms patologinio proceso formoms.

Taigi, jei vaikas turi akių chlamidiją, o mėginys paimtas iš urogenitalinio trakto, o skrandis imamas dėl inkstų tuberkuliozės, neigiamas rezultatas neatmeta fakto, kad pacientas užsikrečia.

Antroji klaida preanalitiniame etape yra neteisingas medžiagos paėmimas tyrimams.

Bendrieji biologinės medžiagos reikalavimai yra didžiausia mikroorganizmų koncentracija mėginyje, taip pat nepageidaujamų priemaišų, slopinančių PGR.

Pavyzdžiui, Chlamydia trachomatis yra įpareigojantis intracellular parasitas, todėl tiriama medžiaga turi turėti daug epitelio ląstelių [4]. Tai reiškia, kad, imant medžiagą šių mikroorganizmų identifikavimui, būtina išbrėžti, o ne tepinėlis, nes Chlamydia trachomatis tepinėliai nebus aptiktos, net jei jie yra organizme dideliuose kiekiuose.

Vartojant medžiagą iš urogenitalinio trakto, būtina vengti slopinti priemaišas, tokias kaip gleivės, kraujas ar pūslės. Norėdami tai padaryti, skrandžius reikia pasiimti ne anksčiau kaip po dviejų valandų po šlapinimosi, moterys atsižvelgia į ciklo dienas [1]. Prieš pradėdami vartoti biomedžiagą, perteklinė gleivinė arba puse turi būti pašalinta steriliu medvilniniu tamponu. Pageidautina, kad medžiaga būtų paimta su specialiais plastikiniais zondais, o tai sumažina kraujo tikimybę mėginyje, be to, skirtingai nuo vatos, jie nesikiša transporto terpės ir tyrimo medžiagos. [1]

Biologinės medžiagos apdorojimas

Tinkamas urogenitalinio įbrėžimo paėmimas yra skausminga procedūra vyrams ir vaikams, todėl tyrimo metu galite naudoti pirmąją ryto šlapimo dalį, kurioje yra didžiausias epitelio kiekis [1]. Ateityje turėsite gauti akių šlapimo nuosėdų. Tačiau nuosėdose yra daug druskų ir karbamido, kuris, naudojant fluorescencinę aptikimo technologiją, denatūravimo zondus, dėl kurių gali būti klaidingai teigiamų rezultatų. Todėl šlapimo ląstelių nuosėdos turi būti nesėkmingai nuplaunamos fiziologiniu tirpalu [4].

Kitas priešanalizės etapo klaida yra netinkamas kraujo vartojimas. Norint išvengti kraujo krešulių pristatymo procese, turite naudoti antikoaguliantus. Daugelyje laboratorijų heparinas naudojamas kaip antikoaguliantas. Vis dėlto heparinas stipriai slopina PGR ir, nepriklausomai nuo naudojamos bandymų sistemos ir mėginio paruošimo metodo, visi su juo esančio mėginio rezultatai yra nepatikimi, jeigu atliekama vidinė PGR kontrolė arba neigiama, neatsižvelgiant į tikrąją padėtį vidaus kontrolės atveju ne [3]

Biologinės medžiagos laikymas

PGR diagnostikos analizės etapo klaidos

Klaidos darbe

Analizės etapo klaidos dažniausiai susijusios su nepastebimomis instrukcijomis, kurios pridedamos prie komplekto, skaityti PGR analizės tyrimui.

Viena iš šių klaidų yra netinkamas mėginių ruošimo sistemos pasirinkimas. Pavyzdžiui, sudėtingų biomedžiagų, pvz., Kraujo plazmos, greitųjų metodų naudojimas yra mažiau pavojingas, nes šiuo atveju labiausiai tikėtina, kad klaidingi rezultatai atsiranda dėl to, kad PGR inhibitoriai lieka bandinyje, o tai savo ruožtu privers QDL specialistą pakartoti eksperimentą ir išsiaiškinti priežastis nesėkmių. Tai yra daug pavojingesnė, jei dėl netinkamai pasirinktos bandymų sistemos kai ar visa patogeno DNR ar RNR bus prarasti bandinio paruošimo proceso metu - šiuo atveju yra rizika gauti klaidingai negatyvų rezultatą.

Antroji klaida - neteisingai paruošti fono vamzdžiai bandymo sistemoms, kuriose fluorescencija aptikta iki galo. Dažniausiai tai yra dėl to, kad laboratorijos darbuotojas pamiršta pakeisti juos, kai atsiranda naujos reagentų serijos arba dėl to nėra ekonomiškumo priežasčių. Gali būti, kad tie patys reakcijos mišinio komponentai vargu ar turi skirtingus fluorescencijos lygius, tačiau skirtingose ​​serijos reagentuose komponentų koncentracija ir didelė skirtingų fluorescencijos lygių tikimybė gali skirtis. Taigi, klaida, kurią kai kuriais atvejais galima pamiršti, kitose gali sukelti daugybę nepatikimų rezultatų.

Kita klaida, susijusi su netinkamu fono vamzdelių paruošimu, yra polimerazės pridėjimas prie jų. Tai gali atsirasti tiek atsitiktinai, tiek dėl to, kad laboratorijos technikas visiškai nesupranta, kodėl nereikia polimerazės įtraukti. Gali būti du scenarijai: jeigu bandymo sistemoje nėra vidinės kontrolės, arba kaip buferį, kuriam netaikoma atranka, naudojama kaip neigiamo kontrolinio pavyzdžio, ir jei bandymo sistemoje yra vidinė kontrolė, kuri yra parafino ir (arba) neigiamo mėginio eiga pabrėžti. Pirmuoju atveju polimerazės pridėjimas negali reikšmingai paveikti rezultato, tačiau šiuo atveju yra užteršimo pavojus, tiek teigiamas, tiek vidinis. Antruoju atveju visos neigiamos vertės yra nepatikimos. Klaida nėra problema, nes normalizavimo reikšmės yra labai didelės, yra maždaug 103, o fluorescencijos vertės kai kuriose mėgintuvėlėse yra daug mažesnės nei 1.

Užteršimas

Užterštumo problema atsiranda, kai laboratorija yra netinkamai organizuota arba nerūpestingai tvarko teigiamus mėginius. Taigi, naudojant gelio elektroforezę kaip aptikimo metodą, kambaryje turi būti atskiras įėjimas ir ventiliacijos sistema. Priešingu atveju tikimybė, kad iš atidarymo vamzdžių amplikonai pateks į kitas patalpas, yra labai didelė. Tai gali paskatinti tai, kad laikui bėgant vis dažniau tiriami mėginiai dažnoms infekcijoms bus teigiami. Tuo pat metu tokio užterštumo pradžioje neigiama kontrolė gali likti gryna, nes klaidingai teigiamų rezultatų pasireiškimas yra statistinis.

Liuminescencinio aptikimo atveju bandymo vamzdeliai neatverti ir teoriškai užteršimo tikimybė yra artima nuliui, tačiau neatmetama jo galimybė atidaryti. Todėl geriau, jei stiprinimas ir aptikimas bus atliekamas atskiroje patalpoje, tada nenumatytos situacijos atveju vienas kambarys bus užterštas.

Kita klaida, vedanti į mėginių užteršimą, susijusi su netiksliu abiejų klinikinių mėginių ir teigiamų kontrolinių mėginių ir standartų tvarkymu. Kai kurie laboratorijos specialistai naudoja vieną patarimą, kad sutaupytų pinigų pridedant tą pačią medžiagą į daugybę vamzdžių. Tai yra normalu, jei vamzdeliai yra tušti arba jų turinys yra vienodas (amplifikacijos vamzdžių paruošimas). Tačiau, jei bandinys yra bandymo mėgintuvėlyje, pvz., Mėginio paruošimo metu, to paties tirpalo įvedimas į skirtingus mėgintuvėlius padidina DNR pernešimo tarp vamzdelių riziką - taip vadinamas kryžminis užteršimas. Siekiant išvengti kryžminio užteršimo, taip pat rekomenduojama naudoti filtrų patarimus, kad būtų galima įvesti mėginius, kuriuose gali būti DNR.

Be to, nerūpestingai dirbant, yra pavojus, kad į mėginį įvedami inhibitoriai (pvz., Talkas su pirštinėmis).

Klaidos aiškinant rezultatą

Kalbant apie klaidas interpretuojant rezultatus, tikslinga apsvarstyti įvairius aptikimo metodus.

Gelio elektroforezės nustatymo metu yra rizika, kad bus priskirti nespecifinius fragmentus kaip specifinius, jei jie yra arti ilgio ir nėra galimybės aiškiai ir nedviprasmiškai palyginti teigiamą kontrolę ir idealiu atveju su ilgio žymekliu. Be to, kadangi mėginiai dažnai yra naudojami ant gelio su vienu antgaliu, užteršimo rizika netgi aptikimo stadijoje, jei galas buvo blogai nuplaunamas arba viename iš mėginių buvo labai didelė DNR koncentracija. Tokio užterštumo laipsnį galima lengvai stebėti, jei juostos yra stebimos sąmoningai neigiamame mėginyje, tačiau jis nėra atskirtas nuo užteršimo laboratorijoje ir reikalauja iš naujo patikrinti visus mėginius.

Viena iš interpretavimo klaidų, susijusių su galutinio taško fluorescencijos aptikimo metodu, yra neatsižvelgimas į foninių vamzdžių normalizavimo vertes ir neigiamų mėginių fluorescencijos vertes. Taigi, jei netinkamai saugomi, fone vamzdeliuose esantys zondai gali suskaidyti ir normalizavimo reikšmės gerokai padidėja nuo kelių valandų iki kelių dienų, o fluorescencijos vertės mėginių atžvilgiu yra daugiau ar mažiau nepakankamai įvertintos. Pagrindinis šiuo atveju gautų rezultatų patikimumo kriterijus gali būti neigiami mėginiai. Nesant skirtumus tarp fono ir amplifikacijos vamzdelių, neigiami mėginiai turi fluorescencijos reikšmes artimas vienybei arba retais atvejais šiek tiek didesni. Jei fluorescencijos vertės viename ar keliuose bandiniuose arba neigiamos kontrolės yra žymiai mažesnės už vieningumą, su dideliu tikimybe galima teigti, kad foniniai vamzdeliai neatitinka šio tyrimo; šiuo atveju juos būtina keisti.

Be anksčiau pateikto pavyzdžio, gali atsitikti taip, kad fono fluorescencija didėja amplifikacijos vamzdeliuose, o fone vamzdeliuose fluorescencija išlieka nepakitusi. Ši situacija gali atsirasti, kai stiprinimo vamzdžiai laikomi kambario temperatūroje. Tokiu atveju padidės teigiamų rezultatų turinys su mažomis fluorescencijos vertėmis. Rezultatai yra tokie patys kaip ir užterštumo laboratorijoje, tačiau šiuo atveju visi mažos fluorescencijos vertės bus maždaug tokios pačios, o taršos atveju tai yra gana retai, nes mažai tikėtina, kad vienodo kiekio pašalinės medžiagos kiekis patenka į visus neigiamus mėgintuvėlius. Tai lengva vengti, jei vieną kartą per mėnesį ar pusantrį pakeičiate fono vamzdelius, šiuo atveju paprastai nėra pakankamai laiko, kad būtų pakankamai didelis skirtumas tarp jau paruošto fono ir stiprinamųjų vamzdelių.

Klaidos po analizės PGR diagnostikos fazėje

Klaidos baigiamojoje, po analizės stadijoje yra susijusios su gydytojo klaidingu PGR analizės rezultatų interpretavimu dėl klaidingų idėjų apie infekcinį agentą arba apie šio metodo galimybes.

Pavyzdžiui, klamidijų kontrolinis tyrimas praėjus 1 savaitei po antibiotikų pabaigos duos teigiamą rezultatą. Gydytojas padarys išvadą apie gydymo neveiksmingumą. Tačiau galutinę išvadą galima padaryti ne anksčiau kaip 4-6 savaites po to, kai pakeičiamas epitelio sluoksnis, kuriame mikroorganizmas parazituojamas [1]. Anksti diagnostika gali rodyti netinkamą rezultatą, nes negyvos mikroorganizmai išlieka epitelio ląstelėse.

Atvirkštinių tyrimų rezultatų atveju yra įmanoma "imunologinė pėdsakai" - antikūnų likutinis lygis, kuris kai kuriuose žmonėse gali išlikti daugelį mėnesių ir net po atsigavimo, arba PGR metu, neatsižvelgiama į bandymų sistemų specifiškumą.

Kas yra PGR? Klaidinga teigiama PGR

Diagnozė, pagrįsta polimerazės grandinine reakcija, pasirodė prieš 30 metų, nes Amerikos mokslininkas Carrie Mulles atliko tyrimus. Šis metodas tapo plačiai paplitęs ir tapo mikrobiologinių tyrimų laimėjimu.

Apskritai, Mulle siūloma technika leidžia klonuoti genus. Iš tyrimo rezultatų atskleista mikrobiologinės diagnostikos priemonės esmė yra tokia. Tarp didžiulio genų informacijos kiekio tapo įmanoma rasti konkretų mikroskopą su būtinu DNR kodu. Šis fragmentas, naudojant natūralų DNR sugebėjimą replikuoti (dauginti), yra pakartotinai klonuojamas.

Visas procesas vyksta in vitro. Mėginių dauginimas atliekamas naudojant polimerazės fermentą. Du mėginiai, paimti konkrečiam DNR skyriui, šukuojami per tirpalą ieškant papildomų sekcijų ir juos sujungti. Susikūrusi svetainė, kuri vėliau nukopijuojama. Būtent tai yra PGR.

Natūralus DNR atsiranda nuolat bet kuriame gyvame organizme. Gana nauja diagnostikos metodika, aprašyta aukščiau, leidžia jums valdyti šį procesą. Be to, poveikis yra ne visoje molekulėje kaip visuma, bet tik tam tikra nukleino rūgšties (DNR) dalis. Reakcija pakartojama, eksponentiškai didinant fragmentines DN porcijas, taigi reakcija vadinama grandine.

Siekiant pradėti grandininę reakciją, biologinei aplinkai, kuri yra surinkta analizei, turi būti išorinis elementas, kitaip nebus jokios reakcijos.

Taikymo sritis

Diagnostiniai tyrimai, pagrįsti CRP, yra sėkmingai naudojami, visų pirma medicinoje. Šis metodas leidžia jums nustatyti užkrėstas ląsteles ir genetines ligas. Pulmonologai gali nustatyti virusinių plaučių uždegimo ir tuberkuliozės rūšis. Ginekologijos ir urologijos praktikoje galima atlikti tyrimus, siekiant nustatyti ligas, kurios anksčiau daugelį metų galėjo nepastebėti pacientams, pavyzdžiui, ureaplazmozei ir chlamidijoms. Šiuo metu infekcinių ligų diagnozavimui naudojamas beveik visų medicinos sričių polimerazės grandinės reakcijos metodas.

Toks teisminis tyrimas taip pat yra būtinas. Analizuojant DNR, gautą iš biologinės medžiagos, kuri lieka nusikaltėlių srityje, specialistai gali nustatyti tam tikrų asmenų dalyvavimą. Atvejai, kai nusikaltėlis nepalieka pėdsakų, ištrindami pirštų atspaudus, seniai tapo istorija.

Net ir nesuvokdami PGR koncepcijos, tai, ko tai be žinios, daugelis galėjo patirti šio diagnozavimo metodo naudą. Tokie tyrimai gali aptikti vienkartines patogenines ląsteles, kurios neapsiriboja kitų imunologinių ir bakterijų diagnostikos metodų galia. Reakcija trunka tik keletą valandų, todėl galite gauti rezultatą darbo dieną.

Klaidos tyrimų rezultatuose

Kasdieniniame laboratorijos darbe bandinių vamzdeliuose gaunama daug DNR medžiagos. Biomedžiagų tyrimo proceso nutraukimas gali sukelti klaidingą teigiamą ar klaidingą neigiamą diagnozavimo rezultatą. Taisyklių pažeidimas bent viename grandinės reakcijos etape gali sukelti klaidingą rezultatą.

Gydantis biomedžiagų, gydytojas turi būti atidus savo pareigoms. Tepiniuose ar įbrėžimuose neturėtų būti kitų elementų, tokių kaip kraujo ląstelės. Tuo pačiu metu visiško tyrimo metu reikalingas pakankamas epitelinių ląstelių kiekis medžiagoje, o nesąžiningai surinkta medžiaga turės didelę procentinę dalį neinformatyvių gleivių.

Daugeliu atveju klaidingai teigiamas PCZ rezultatas priklauso nuo infekuotų DNR ląstelių transportavimo ir saugojimo metodo. Dėl technologinių reikalavimų pažeidimo atliekant visus tyrimo etapus, užkrėstoje medžiagoje gali būti sunaikinta ar pakeista jo struktūra, dėl kurios neįmanoma atlikti reakcijos.

Kaip ir visi kiti laboratoriniai tyrimai, polimerazės grandininė reakcija reikalauja tinkamo visų panaudotų prietaisų apdorojimo. Laboratorija ir personalas turi stebėti sterilumą visuose diagnostinių tyrimų etapuose. Nesilaikant sanitarinių normų, gali būti nustatoma atitinkamai užsikrėtimo užsikrėtimas ir klaidingai teigiamas tyrimo rezultatas.

Labai svarbu atlikto darbo kokybei yra naudojami reagentai. Diagnozei, naudojant polimerazės grandininę reakciją, DNR dedama į nukleotidinį tirpalą. Visos medžiagos turi būti naudojamos. Pigesnis procesas sumažina jo efektyvumą.

Diagnostinis metodas, pagrįstas PGR, suteikia 100% rezultatą. Tačiau dėl to, kad naudojamos medžiagos yra labai jautrios įvairiems veiksniams, tik kvalifikuota laboratorija gali pateikti visiškai teisingą rezultatą.

PGR testo rezultatai

PGR tyrimai jau seniai yra įvairių ligų laboratorinių ir diagnostinių tyrimų diapazono dalis.

Per keletą dešimtmečių plėtros ir tobulinimo, technika tapo nepakeičiama dermatovenerologijos tarnybai.

Šiame straipsnyje jūs sužinosite

Kokie yra PGR tyrimai ir jų rezultatai.

Polimerazės grandininė reakcija yra diagnostinis metodas, leidžiantis nustatyti ligos sukėlėją.

Norimas veiksnys yra unikali genetinės medžiagos sekos, esančios tik vienos rūšies ar patogeninių mikroorganizmų veislės mikrobinėje ląstelėje.

Dažniausiai tyrimo tikslas yra bakterijos ar viruso DNR, tačiau PCR metodu taip pat pateikiami rezultatai apie mikroorganizmų RNR.

Kokios yra skirtingos biologinės medžiagos, naudojamos:

  • seilių
  • audinio biopsija
  • šlapimas
  • cerebrospinalinis skystis
  • kraujas
  • gleivinės membranos nuodėmės

PGR diagnostikos rezultatai yra

duomenys apie ligos buvimą ar nebuvimą yra paprasčiausias ir prieinamesnė informacija.

Yra PCR metodika, kurios rezultatai, be infekcijos fakto nustatymo, leidžia įvertinti infekcijos aktyvumą, ligos dinamiką ir atsaką į gydymą.

Ši parinktis vadinama "realaus laiko polimerazės grandinine reakcija" ir yra plačiai naudojama pacientams, sergantiems per kraują lėtinėmis virusinėmis infekcijomis - hepatitu, ŽIV.

Pagrindinis technikos privalumas yra didžiausias jautrumas ir specifiškumas.

Tokia analizė yra greita ir labai tiksli.

Pateikdami patikimus duomenis, galite pradėti gydymą kuo anksčiau.

PGR tyrimas susideda iš trijų pakopų:

  • Mėginio paruošimas po medžiagos paėmimo.
  • Faktinė polimerazės reakcija, susidedanti iš daugybės kopijavimo medžiagos fragmentų.
  • Rezultatų interpretavimas.

PCR tyrimo rezultatai yra teigiami, jei nustatomas įtariamas patogenas.

Jei ne, rezultatas yra neigiamas.

Tokiu būdu nėra patvirtintos bandymų rezultatų formos.

Taip yra dėl to, kad duomenų tyrimas ir fiksavimas palaiko kompiuterį.

Atitinkamai, formos grafikai ir duomenys įvedami kaip numatyta programinėje įrangoje, kurioje veikia įrenginys.

Todėl testo rezultatų iššifravimui reikia specialaus gydytojo mokymo ir patirties.

Tuo atveju, kai atliekama realaus laiko polimerazės grandininė reakcija, mikroorganizmo genetinės medžiagos aptiktų kopijų skaičius atskirai nurodomas bandymų rezultatų forma.

Žinoma, jei jie bus nustatyti iš esmės.

Teigiamas rezultatas

Visi lytiškai plintančių ligų ir kraujo infekcijų (hepatitas, ŽIV) sukėlėjai, kartą žmogaus organizme, pradeda daugintis, tačiau tai nepaaiškėja.

Čia vadinamasis inkubacinis laikotarpis ar tropis, latentinis infekcijos kelias.

Tokiais atvejais PCR vis dar nustato genetinius patogenų žymenis diagnostinėje medžiagoje per kelias dienas nuo infekcijos momento.

Tam, kad analizė taptų teigiama, pakanka vienos DNR molekulės arba patogeniško mikroorganizmo RNR surinktoje diagnostinėje medžiagoje.

Daugeliui ankstyvųjų prietaisų yra technologinė jautrumo slenkstis, ty 40 mikroorganizmų.

Tačiau, kaip taisyklė, jei asmuo yra tikrai užsikrėtęs viena ar kita venerine liga ar STD, jo patogenai mėginių yra daugiau nei šis skaičius, o analizė bus teigiama.

Neigiamas rezultatas

Apskritai ši galimybė yra įmanoma dviem atvejais: asmuo nėra užkrėstas arba neteisingai surinkta diagnostikos medžiaga.

Žinoma, negalima atmesti galimybės, kad patogenų koncentracija bandomajame mėginyje gali būti mažesnė nei prietaiso jautrumo riba.

Tačiau tokia situacija yra labai reta, o jei gydytojas abejoja, analizė visada gali būti kartojama po kurio laiko.

Jei PGR diagnostikos rezultatai išlieka neigiami, tada asmuo yra sveikas.

Priešingu atveju, gavę antrąjį testą teigiamai, tai reiškia, kad pacientas yra užsikrėtęs ir būtina pradėti gydymą.

Gydytojas turėtų ištirti PGR tyrimo rezultatus

Gydytojo gydymo kursą žinantis gydytojas turi ištirti PGR tyrimo rezultatus.

Idealiu atveju tai turėtų būti tas pats specialistas, kuris renka tyrimo diagnostikos medžiagą, gali stebėti pacientą ir stebėti visus žmogaus sveikatos pokyčius.

Deja, šiuolaikinių venerinių ligų ir infekcijų klinikinė eiga labai skiriasi nuo klasikinio.

Tokiais atvejais netgi PGR tyrimų rezultatai turėtų būti pagrįsti kitų tyrimų duomenimis:

  • genetinės išskyros tepinėlio mikroskopija iš šlaplės
  • serologiniai kraujo tyrimai dėl specifinių patogenų antikūnų (ELISA, TPHA ir kt.)
  • kultūros sėja

Laimei, dažnai nerasta situacijų, kai skirtingų metodų duomenys prieštarauja vieni kitiems. Pavyzdžiui - PGR yra teigiamas ir ELISA yra teigiamas.

Tai atsitinka paciento gydymo pabaigoje, kai patogeniniai mikroorganizmai jau yra sunaikinti ir žmogaus organizme nerandami.

Tačiau antikūnai (imunoglobulinai) infekcinių agentų antigenams kraujyje vis dar cirkuliuoja kelias savaites ar net mėnesius, metus.

Klinikiniame išgijime šis skirtumas interpretuojamas dėl PGR, nes jo rezultatai yra tikslūs nei antikūnai.

Kultūra sėjama laikoma jautresnė, tačiau norint gauti rezultatų palaukite kelias dienas ar net savaites.

Todėl bakteriologinis tyrimas atliekamas tik tada, kai PCR negali užtikrinti garantuoto tikslaus atsakymo.

Svarbu sugebėti palyginti gautų duomenų analizę ir klinikines infekcijos eigą.

Taigi, kai kuriais atvejais PCR rezultatas yra teigiamas, nors patogeną sėkmingai pašalina imuninė sistema.

Kadangi pacientas ką tik baigė gydymą, mirusieji patogeniniai mikroorganizmai vis dar lieka jo kūne.

Jų genomas bus aptiktas, bet vis tiek, tada teigiamas rezultatas nereiškia ligos buvimo.

Galima klaidingai neigiama PGR analizė:

  • su klaidingu požiūriu į pacientą
  • atsižvelgiant medžiagą ne iš pageidaujamos biologinės aplinkos

Labai svarbu atidžiai išaiškinti visas ligos detales ir niuansus.

Ypatingą dėmesį reikėtų atkreipti į tai, ką ir kaip asmuo pritaikė nuo tada, kai atsirado pirmieji simptomai, siekdami profesinės medicinos pagalbos.

Pavyzdžiui - antibiotikai, kuriuos galima įsigyti bet kurioje vaistinėje.

Savarankiškai vartojami vaistai dažnai sukelia žymiai mažesnį mikrobų skaičių, dėl to gali atsirasti klaidingai neigiamas PGR rezultatas.

Tai reiškia, kad asmens, gydytojo, vaidmuo yra susilpnintas tik tinkamai surenkant diagnostinę medžiagą ir vėliau iššifruojant gautus rezultatus.

Metodo diagnostikos galimybės

Šis laboratorinių tyrimų metodas yra labai universalus.

Yra PCR diagnozė:

  • lytiniu keliu plintančios infekcijos.
  • Taip pat kai kurie kvėpavimo takų ligos (kosulys, bronchospazė)
  • ypač pavojingos infekcijos (ŽIV), hepatitas
  • žarnyno infekcijų sukeliantys veiksniai (rotavirusai, salmonelės, Helicobacter pylori)
  • gripo virusai ir kiti